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增強革蘭氏陽性細胞中的蛋白質(zhì)生產(chǎn)的新型啟動子和5′-非翻譯區(qū)突變的制作方法

文檔序號:42132337發(fā)布日期:2025-06-10 17:27閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種變體核酸,其包含在seq?id?no:8至seq?id?no:46中的任一個中所示的至少一個突變,其中所述變體核酸序列的核苷酸位置根據(jù)seq?id?no:1編號。

2.如權(quán)利要求2所述的變體核酸,其與seq?id?no:1具有至少約97.5%、97.6%、97.7%、97.8%、97.9%、98.0%、98.1%、98.2%、98.3%、98.4%、98.5%、98.6%、98.7%、98.8%、98.9%、99.0%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、99.9%、或100%同一性。

3.一種多核苷酸,其包含如權(quán)利要求1所述的變體核酸序列。

4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其可操作地連接到編碼目的蛋白(poi)的下游核酸。

5.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其可操作地連接到編碼前區(qū)的下游核酸,所述編碼前區(qū)的下游核酸可操作地連接到編碼目的蛋白(poi)的下游核酸。

6.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其可操作地連接到編碼蛋白質(zhì)信號序列的下游核酸,所述編碼蛋白質(zhì)信號序列的下游核酸可操作地連接到編碼目的蛋白(poi)的下游核酸。

7.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其可操作地連接到編碼蛋白質(zhì)信號序列的下游核酸,所述編碼蛋白質(zhì)信號序列的下游核酸可操作地連接到編碼前區(qū)序列的下游核酸,所述編碼前區(qū)序列的下游核酸可操作地連接到編碼目的蛋白(poi)的下游核酸。

8.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其進一步包含可操作地連接到編碼所述poi蛋白的所述核酸的下游終止子序列。

9.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸,其中所述poi選自由以下組成的組:酶、抗體、受體蛋白、凝集素和調(diào)節(jié)蛋白。

10.如權(quán)利要求11所述的多核苷酸,其中所述poi是選自由以下組成的組的酶:乙酰酯酶、氨肽酶、淀粉酶、阿拉伯聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、碳酸酐酶、羧肽酶、過氧化氫酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、凝乳酶、角質(zhì)酶、脫氧核糖核酸酶、差向異構(gòu)酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡聚糖酶、葡聚糖裂合酶、內(nèi)切-β-葡聚糖酶、葡糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、葡糖醛酸酶、糖基水解酶、半纖維素酶、己糖氧化酶、水解酶、轉(zhuǎn)化酶、異構(gòu)酶、漆酶、脂肪酶、裂合酶、甘露糖苷酶、氧化酶、氧化還原酶、果膠酸裂合酶、果膠乙酰酯酶、果膠解聚酶、果膠甲基酯酶、果膠分解酶、過水解酶、多元醇氧化酶、過氧化物酶、酚氧化酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、肽酶、鼠李糖-半乳糖醛酸酶、核糖核酸酶、轉(zhuǎn)移酶、轉(zhuǎn)運蛋白、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、木聚糖酶、己糖氧化酶、及其組合。

11.如權(quán)利要求12所述的多核苷酸,其中所述酶是蛋白酶。

12.如權(quán)利要求13所述的多核苷酸,其中所述蛋白酶是枯草桿菌蛋白酶。

13.一種表達盒,其包含如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。

14.一種革蘭氏陽性細菌細胞,其包含引入的如權(quán)利要求15所述的盒。

15.如權(quán)利要求16所述的革蘭氏陽性細胞,其中所述盒被整合到所述細胞的基因組中。

16.一種用于在革蘭氏陽性細菌細胞中生產(chǎn)目的蛋白(poi)的方法,所述方法包括:

17.如權(quán)利要求18所述的方法,其中所述變體啟動子/5′-utr序列與seq?id?no:1具有至少約97.5%、97.6%、97.7%、97.8%、97.9%、98.0%、98.1%、98.2%、98.3%、98.4%、98.5%、98.6%、98.7%、98.8%、98.9%、99.0%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、99.9%、或100%同一性。

18.如權(quán)利要求18所述的方法,其中相對于在相同條件下培養(yǎng)的對照細胞,所述經(jīng)修飾的細胞生產(chǎn)增加量的所述poi,其中所述對照細胞包含引入的多核苷酸,所述引入的多核苷酸包含seq?id?no:1的上游啟動子/5′-utr序列,所述上游啟動子/5′-utr序列可操作地連接到編碼與所述經(jīng)修飾的細胞相同的poi的下游orf。

19.如權(quán)利要求18所述的方法,其中在培養(yǎng)至少七十二(72)小時之后,相對于所述對照細胞,所述經(jīng)修飾的細胞生產(chǎn)增加量的所述poi。

20.如權(quán)利要求21所述的方法,其中在培養(yǎng)至少七十二(72)小時之后,相對于所述對照細胞,所述poi的增加量是至少5%。

21.如權(quán)利要求18所述的方法,其中所述poi選自由以下組成的組:酶、抗體、受體蛋白、凝集素和調(diào)節(jié)蛋白。

22.如權(quán)利要求18所述的方法,其中所述革蘭氏陽性細菌細胞是芽孢桿菌屬物種(bacillus?sp.)細胞。


技術(shù)總結(jié)
本公開總體上涉及微生物宿主細胞、分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵、蛋白質(zhì)生產(chǎn)等領(lǐng)域。本公開的某些方面涉及新型啟動子和5′?非翻譯區(qū)核酸(DNA)序列。

技術(shù)研發(fā)人員:F·格德埃格伯,C·邦吉奧爾尼,R·L·弗里希,H·穆爾德
受保護的技術(shù)使用者:丹尼斯科美國公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/6/9
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