背景技術(shù)：

1、1.領(lǐng)域

2、本發(fā)明涉及新型分泌信號肽的治療性應(yīng)用。

3、2.背景

4、因mrna具有模塊化特性及提供定制的“指令”來創(chuàng)建功能性蛋白質(zhì)的能力，所以最近的科學(xué)發(fā)現(xiàn)凸顯了mrna無數(shù)的治療性應(yīng)用。臨床研究不斷證實其良好的療效，進一步凸顯了其作為下一代基因藥物的潛力，而科學(xué)家們對其潛在應(yīng)用的研究才剛剛起步。在mrna生物學(xué)取得進展的同時，在脂質(zhì)納米顆粒(lnp)、聚合物納米顆粒、和其他介導(dǎo)安全有效遞送核酸的方法的領(lǐng)域也取得了重大進展。迄今為止，大多數(shù)研究的重點都是擴大編碼多肽在細胞內(nèi)的表達。然而，對編碼蛋白質(zhì)的翻譯后控制以及蛋白質(zhì)在體內(nèi)的靶向定位和分泌卻關(guān)注較少。

5、在細胞內(nèi)，存在著多種獨特的途徑和過程，可以將蛋白質(zhì)運送到細胞核和線粒體等各種細胞器，并通過分泌途徑將蛋白質(zhì)輸出到胞外空間。不過，為了利用這些運輸系統(tǒng)，編碼每種蛋白質(zhì)的mrna在蛋白質(zhì)序列的上游還含有一個隱喻的運輸標(biāo)簽，即信號肽(sp)。然后，該標(biāo)簽會通知適當(dāng)?shù)募毎麢C制，將蛋白質(zhì)運送到細胞內(nèi)的特定位置，或?qū)⑵浒b用于分泌到胞外空間。為治療性mrna設(shè)計新型信號序列可顯著有利于編碼的治療性蛋白質(zhì)的遞送、定位和清除。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、在某些方面，本公開涵蓋一種工程化信號肽，其包含seq?id?no：9-29中任一氨基酸序列及其變體或衍生物。在某些方面，信號肽與異源多肽融合。在某些方面，異源多肽是治療性或診斷性多肽，其非限制性實例包括抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗微生物、抗真菌(anti-fungal)、抗蠕蟲、降膽固醇(hypocholestrolemic)、抗糖尿病、抗纖維化、鎮(zhèn)痛、麻醉、抗衰老、抗抑郁、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗皮炎、抗水腫、抗過敏、抗角化過度(anti-hyperkeratolyte)、抑真菌(antimycotic)、抗瘙癢、心血管治療性、化療、激素、蛋白質(zhì)替代治療性、多肽治療性、疫苗、病毒疫苗、治療診斷性、診斷性或分泌治療性多肽。

2、在某些方面，異源多肽是酶、營養(yǎng)劑、食品添加劑、增味劑和/或化妝品。在某些方面，異源多肽是報告多肽，其非限制性實例包括熒光蛋白、lacz(b-半乳糖苷酶)、cat(氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶)或熒光素酶。在某些方面，熒光蛋白是gfp(綠色熒光蛋白)、bfp(藍色熒光蛋白)、yfp(黃色熒光蛋白)、rfp(紅色熒光蛋白)、mcherry或熒光素酶中的任一種。

3、在某些方面，本公開還涵蓋重組多核苷酸序列，其包含編碼seq?id?no：9-29中任一信號肽的核酸序列。在某些方面，核酸序列是dna序列。在某些方面，核酸序列是rna序列。在某些方面，重組多核苷酸包括seq?id?no：30-50中任一核酸序列或其變體或衍生物。在某些方面，多核苷酸序列包括與seq?id?no：30-50中任一序列對應(yīng)的核糖核酸序列或其變體或衍生物。

4、在某些方面，重組多核苷酸編碼與信號肽同框架的異源多肽。在某些方面，異源多肽是治療性或診斷性多肽，其非限制性實例包括抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗微生物、抗真菌、抗蠕蟲、降膽固醇、抗糖尿病、抗纖維化、鎮(zhèn)痛、麻醉、抗衰老、抗抑郁、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗皮炎、抗水腫、抗過敏、抗角化過度、抑真菌、抗瘙癢、心血管治療性、化療、激素、蛋白質(zhì)替代治療性、多肽治療性、疫苗、病毒疫苗、治療診斷性、診斷性或分泌治療性多肽。

5、在某些方面，異源多肽是一種酶、營養(yǎng)劑、食品添加劑、增味劑和/或化妝品。在某些方面，異源多肽是報告多肽，其非限制性實例包括熒光蛋白、lacz(b-半乳糖苷酶)、cat(氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶)或熒光素酶。在某些方面，熒光蛋白是gfp(綠色熒光蛋白)、bfp(藍色熒光蛋白)、yfp(黃色熒光蛋白)、rfp(紅色熒光蛋白)、mcherry或熒光素酶中的任意一種。

6、在一些示例性方面，重組多核苷酸編碼具有seq?id?no：55-58中任一序列或其功能片段、衍生物或變體的異源多肽。在某些方面，異源多肽是抗pd-l1抗體、enbrel、mcherry或hepo或其功能片段、衍生物或變體。

7、在某些方面，本公開還涵蓋治療性組合物，其包含遞送系統(tǒng)和多核苷酸序列，該多核苷酸序列包含編碼信號肽和治療性多肽的核酸序列。在某些方面，信號肽包括seq?idno：9-29中任一氨基酸序列或其變體或衍生物。在某些方面，編碼信號肽的多核苷酸序列包括與seq?id?no：30-50中任一序列對應(yīng)的核酸序列或其變體或衍生物。

8、在某些方面，遞送系統(tǒng)是聚合物、聚合物復(fù)合物(polyplexes)、脂質(zhì)、脂質(zhì)類似物(lipidoids)、脂質(zhì)復(fù)合物(lipoplexes)、脂質(zhì)體、聚合物納米顆粒、納米顆粒、脂質(zhì)納米顆粒(lnp)、核殼納米顆粒、固體脂質(zhì)納米顆粒、金屬納米顆粒、自組裝核酸納米顆粒、透明質(zhì)酸酶、納米顆粒模擬物、核糖核蛋白、帶正電荷的肽、小分子rna偶聯(lián)物、適配體rna嵌合體、rna融合蛋白復(fù)合物及其任意組合中的任一種。在某些方面，遞送系統(tǒng)是包含可電離氨基脂質(zhì)的脂質(zhì)納米顆粒。在某些方面，脂質(zhì)納米顆粒還包括磷脂、膽固醇、或聚合物脂質(zhì)中的一種或多種。在某些方面，遞送系統(tǒng)包括iphos?lnp、mdlnp、肝臟sort?lnp、肺臟sort?lnp、或脾臟sort?lnp中的任一種。在某些方面，遞送系統(tǒng)是選自合成材料儲庫、聚合物儲庫、脂質(zhì)儲庫、控釋水凝膠儲庫、或控釋聚合物儲庫的受控系統(tǒng)。

9、在某些方面，治療性組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在某些方面，治療性組合物中的治療性多肽是抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗微生物、抗真菌、抗蠕蟲、降膽固醇、抗糖尿病、抗纖維化、鎮(zhèn)痛、麻醉、抗衰老、抗抑郁、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗皮炎、抗水腫、抗過敏、抗角化過度、抗霉菌、抗瘙癢、心血管治療性、化療、激素、蛋白質(zhì)替代治療性、多肽治療性、疫苗、病毒疫苗、治療診斷性、診斷性或分泌治療性多肽。

10、在某些方面，本公開還涵蓋一種診斷、預(yù)防或治療方法，包括向有需要的受試者施用有效量的本文公開的組合物。

11、在某些方面，診斷、預(yù)防或治療的方法包括通過以下一種或多種途徑施用本文公開的組合物：腸胃外、口服、脂肪內(nèi)、動脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、顱內(nèi)、皮內(nèi)、病灶內(nèi)、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、直腸內(nèi)、囊內(nèi)、氣管內(nèi)、腫瘤內(nèi)、臍內(nèi)、陰道內(nèi)、靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、玻璃體內(nèi)、脂質(zhì)體、局部、粘膜、腸胃外、直腸、結(jié)膜下、皮下、舌下、外用(topical)、經(jīng)頰、或經(jīng)皮途徑。在某些方面，施用是通過選自植入物、合成材料儲庫、聚合物儲庫、脂質(zhì)儲庫、控釋水凝膠儲庫、或控釋聚合物儲庫的受控系統(tǒng)進行的。

12、在某些方面，需要診斷、預(yù)防或治療的受試者疑似患有或經(jīng)診斷患有自身免疫性病癥、癌癥、糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)疾病、細菌感染、真菌感染、病毒感染、或纖維化中的任一種。在某些方面，受試者需要預(yù)防。在某些方面，本文公開的治療性多肽在有需要的受試者體內(nèi)系統(tǒng)性分泌。在某些方面，治療性多肽適合在肺臟、肝臟或脾臟中的任一種中表達。在某些方面，受試者是哺乳動物。在某些方面，受試者是人。

13、在某些方面，本公開還涵蓋一種重組多肽，其包含：與seq?id?no：1-4中任一序列對應(yīng)的信號肽或其變體或衍生物；以及異源多肽。

14、在某些方面，本公開還涵蓋重組多核苷酸，其包含編碼與seq?id?no.1-4中任一序列對應(yīng)的信號肽或其變體或衍生物和與信號肽同框架的異源多肽的核酸序列。在某些方面，核酸序列可以是與seq?id?no：5-8對應(yīng)的dna或rna序列或其變體或衍生物。

15、在某些方面，異源多肽是治療性或診斷性多肽，例如抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗微生物、抗真菌、抗蠕蟲、降膽固醇、抗糖尿病、抗纖維化、鎮(zhèn)痛、麻醉、抗衰老、抗抑郁、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗皮炎、抗水腫、抗過敏、抗角化過度、抑真菌、抗瘙癢、心血管治療性、化療、激素、蛋白質(zhì)替代治療性、多肽治療性、疫苗、病毒疫苗、治療診斷性、診斷性或分泌治療性多肽。在某些方面，異源多肽是酶、營養(yǎng)劑、食品添加劑、增味劑和/或化妝品。在某些方面，異源多肽是報告多肽，選自熒光蛋白、lacz(b-半乳糖苷酶)、cat(氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶)或熒光素酶。在某些方面，異源多肽是例如抗pd-l1抗體、enbrel、hepo或其功能片段、衍生物或變體。

16、在某些方面，本公開還涵蓋治療性組合物，其包含遞送系統(tǒng)和多核苷酸序列，該多核苷酸序列包含編碼對應(yīng)于seq?id?no：1-4中任一序列的信號肽或其變體或衍生物和治療性多肽的核酸序列。在某些方面，編碼信號肽的多核苷酸序列包括seq?id?no：5-8中任一核酸序列或其變體或衍生物。在某些方面，編碼信號肽的多核苷酸序列包括與seq?id?no：5-8中任一序列對應(yīng)的核糖核酸序列或其變體或衍生物。在某些方面，本文所公開的治療性組合物的遞送系統(tǒng)的非限制性實例包括聚合物、聚合物復(fù)合物、脂質(zhì)、脂質(zhì)類似物、脂質(zhì)復(fù)合物、脂質(zhì)體、聚合物納米顆粒、納米顆粒、脂質(zhì)納米顆粒(lnp)、核殼納米顆粒、固體脂質(zhì)納米顆粒、金屬納米顆粒、自組裝核酸納米顆粒、透明質(zhì)酸酶、納米顆粒模擬物、核糖核蛋白、正電荷肽、小分子rna偶聯(lián)物、適配體rna嵌合體、rna融合蛋白復(fù)合物及其任意組合。在某些方面，遞送系統(tǒng)是包含可電離氨基脂質(zhì)的脂質(zhì)納米顆粒。在某些方面，脂質(zhì)納米顆粒還包含磷脂、膽固醇、或聚合物脂質(zhì)中的一種或多種。在某些方面，遞送系統(tǒng)包括iphos?lnp、mdlnp、肝臟sort?lnp、肺臟sort?lnp、或脾臟sort?lnp中的任一種。在某些方面，遞送系統(tǒng)是選自合成材料儲庫、聚合物儲庫、脂質(zhì)儲庫、控釋水凝膠儲庫、或控釋聚合物儲庫的受控系統(tǒng)。

17、在某些方面，包含與seq?id?no：1-4對應(yīng)的信號肽或其變體或衍生物的治療性組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在某些方面，治療性組合物包含治療性多肽，例如抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗微生物、抗真菌、抗蠕蟲、降膽固醇、抗糖尿病、抗纖維化、鎮(zhèn)痛、麻醉、抗衰老、抗抑郁、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗皮炎、抗水腫、抗過敏、抗角化過度、抗霉菌、抗瘙癢、心血管治療性、化療、激素、蛋白質(zhì)替代治療性、多肽治療性、疫苗、病毒疫苗、治療診斷性、診斷性或分泌治療性多肽。

18、在某些方面，本公開還涵蓋一種診斷、預(yù)防或治療方法，包括向有需要的受試者施用有效量的組合物，該組合物包含與seq?id?no：1-4對應(yīng)的信號肽或其變體或衍生物。這些治療性組合物可以例如通過以下一種或多種途徑施用：腸胃外、口服、脂肪內(nèi)、動脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、顱內(nèi)、皮內(nèi)、病灶內(nèi)、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、直腸內(nèi)、囊內(nèi)、氣管內(nèi)、腫瘤內(nèi)、臍內(nèi)、陰道內(nèi)、靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、玻璃體內(nèi)、脂質(zhì)體、局部、粘膜、腸胃外、直腸、結(jié)膜下、皮下、舌下、外用、經(jīng)頰、或經(jīng)皮途徑。在某些方面，施用是通過選自植入物、合成材料儲庫、聚合物儲庫、脂質(zhì)儲庫、控釋水凝膠儲庫、或控釋聚合物儲庫的受控系統(tǒng)進行的。在某些方面，受試者疑似患有或經(jīng)診斷患有自身免疫性病癥、癌癥、糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)疾病、細菌感染、真菌感染、病毒感染、或纖維化中的任一種。在某些方面，受試者是需要預(yù)防的哺乳動物，例如人類。在某些方面，組合物在有需要的受試者體內(nèi)系統(tǒng)性分泌，或定向在肺臟、肝臟或脾臟中的任一器官中進行器官特異性表達。在某些方面，受試者疑似患有或經(jīng)診斷患有自身免疫性病癥病、癌癥、糖尿病、或纖維化中的任一種。