本申請涉及微生物，特別涉及一株用于防治玉米大斑病的生防真菌菌株發(fā)酵液及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、目前，化學(xué)農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)中的廣泛使用已導(dǎo)致顯著問題，如病原菌及蟲害的抗性、土壤中的殘留物以及土壤生產(chǎn)力不斷下降。因此，有益微生物作為農(nóng)業(yè)領(lǐng)域更安全的替代品正受到越來越多的關(guān)注?；@狀菌新物種的挖掘?yàn)樯锓乐螏砹烁噘Y源?；@狀菌屬及其代謝產(chǎn)物在農(nóng)業(yè)中被廣泛應(yīng)用于生物防治。
2、產(chǎn)紫籃狀菌（talaromyces?purpureogenus），隸屬于子囊菌門、散囊菌綱、散囊菌目、發(fā)菌科、籃狀菌屬。起初籃狀菌屬為青霉屬的有性型屬，無性階段叫做青霉，有性階段叫做籃狀菌。考慮到命名優(yōu)先權(quán)和單一名稱命名法，自2011年7月起，samson等人將大多數(shù)已接受的青霉亞屬（biverticillium）的種轉(zhuǎn)移至籃狀菌屬（talaromyces）。籃狀菌的開發(fā)利用為植物病害的生物防治提供了新的后備力量。黃色籃狀菌（talaromyces?flavus）和產(chǎn)紫籃狀菌（talaromyces?purpureogenus）可用于農(nóng)林植物蟲害的生物防治。kim等從人參種子中分離的黃色籃狀菌對(duì)尖鐮孢菌（fusarium?oxysporum）、立枯絲核菌（rhizoctoniasolani）、核盤菌（sclerotinia?nivalis）、灰葡萄孢（botrytis?cinerea）和辣椒疫霉（phytophthora?capsici）等植物病原菌具有拮抗作用；產(chǎn)紫籃狀菌對(duì)馬鈴薯瘡痂病病菌及西紅花莖腐病菌均具有較好的抑菌效果。但目前產(chǎn)紫籃狀菌對(duì)玉米大斑菌的抑制效果未見報(bào)道。玉米大斑病由凸臍蠕孢[exserohilum?turcicum(pass.)?leonard?et?suggs]侵染引起。當(dāng)前玉米大斑病的防控體系以抗性品種選育和化學(xué)藥劑為核心策略，但這兩類措施均面臨顯著挑戰(zhàn)。在抗病品種應(yīng)用方面，玉米大斑菌的生理小種高度分化特性導(dǎo)致品種抗性易被突破?，加之抗病育種周期長，進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)際防控效果常出現(xiàn)區(qū)域性衰退。在化學(xué)防治領(lǐng)域，主流藥劑如丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑等三唑類殺菌劑雖能快速抑制病害，但存在多重風(fēng)險(xiǎn)如施藥窗口期短；病原菌易通過基因突變產(chǎn)生抗藥性；長期使用導(dǎo)致土壤微生物多樣性下降，并伴隨農(nóng)藥殘留超標(biāo)等生態(tài)安全問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本申請?zhí)峁┝艘环N用于防治玉米大斑病的生防真菌菌株發(fā)酵液及其應(yīng)用，該菌株及其發(fā)酵液能夠高效抑制多種病原菌，其發(fā)酵液內(nèi)活性物質(zhì)較為穩(wěn)定，活性有效期長、內(nèi)吸性較強(qiáng)、不易降解、耐高溫、耐微波輻射，并可以顯著提高化學(xué)藥劑的抑菌效果，與化學(xué)農(nóng)藥混配具有顯著減藥增效的作用。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本申請?zhí)峁┮韵录夹g(shù)方案：
3、本申請?zhí)峁┝水a(chǎn)紫籃狀菌（talaromyces?purpureogenus），保藏編號(hào)為cgmcc?no.41911。
4、本申請還提供了上述產(chǎn)紫籃狀菌的發(fā)酵液。
5、在本申請的一些具體實(shí)施方案中，上述發(fā)酵液的制備方法包括：將上述產(chǎn)紫籃狀菌接種于pdb培養(yǎng)，將得到的培養(yǎng)液過濾，取濾液，得到發(fā)酵液。
6、在本申請的一些具體實(shí)施方案中，上述發(fā)酵液，所述培養(yǎng)的溫度為26℃、27℃、28℃、29℃或30℃。
7、在本申請的一些具體實(shí)施方案中，上述發(fā)酵液，所述培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為160?rpm、170rpm、180?rpm、190?rpm或200?rpm。
8、在本申請的一些具體實(shí)施方案中，上述發(fā)酵液，所述培養(yǎng)的時(shí)間為5天、6天、7天、8天或9天。
9、在本申請的一些具體實(shí)施方案中，上述發(fā)酵液的所述過濾的濾膜孔徑為0.22?μm。
10、本申請還提供了上述產(chǎn)紫籃狀菌或上述發(fā)酵液在以下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
11、（i）拮抗病原菌；
12、（ii）防治玉米大斑??；
13、所述病原菌包括灰霉菌（botrytis?cinerea）、稻瘟菌（magnaporthe?grisea）、玉米大斑菌（exserohilum?turcicum）或大豆菌核（sclerotinia?sclerotiorum）。
14、本申請還提供了組合物，包含：
15、（i）上述產(chǎn)紫籃狀菌或上述發(fā)酵液；
16、（ii）丁香戊唑醇或吡唑醚菌酯。
17、本申請還提供了上述產(chǎn)紫籃狀菌、上述發(fā)酵液或上述組合物在制備防治玉米大斑病的生防制劑中的應(yīng)用。
18、本申請還提供了生防制劑，包含以下任一項(xiàng)：
19、（a）上述產(chǎn)紫籃狀菌或上述發(fā)酵液；
20、（b）上述組合物。
21、本申請還提供了防治玉米大斑病的方法，包括使用以下任一項(xiàng)：
22、（a）上述產(chǎn)紫籃狀菌；
23、（b）上述發(fā)酵液；
24、（c）上述組合物；
25、（d）上述生防制劑。
26、本發(fā)明有以下有益效果：
27、如背景技術(shù)所述，化學(xué)防治存在諸多缺陷，而生物防治不僅對(duì)病原菌具有抑制作用，并且對(duì)環(huán)境友好無污染，本申請?zhí)峁┝艘环N用于防治玉米大斑病的生防真菌菌株發(fā)酵液及其應(yīng)用，同時(shí)首次系統(tǒng)性的揭示了該生防真菌菌株發(fā)酵液的生防功能特性，為玉米大斑病的綠色防控提供了突破性解決方案。具體而言，本申請通過對(duì)比產(chǎn)紫籃狀菌fvv4和fv11菌株差別發(fā)現(xiàn)，fvv4菌株能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的抑菌物質(zhì)，能夠在對(duì)峙培養(yǎng)中引起對(duì)峙菌絲細(xì)胞的內(nèi)含物流出形成扇形凸起，且菌絲后期斷裂死亡失去活力。這一現(xiàn)象為首次發(fā)現(xiàn)。同時(shí)fvv4菌株發(fā)酵液能夠完全抑制多種病原菌，該發(fā)酵液內(nèi)活性物質(zhì)較為穩(wěn)定，活性有效期長、內(nèi)吸性較強(qiáng)、不易降解、耐高溫、耐微波輻射。fvv4菌株發(fā)酵液的上述特性未見相關(guān)報(bào)道，本申請為首次報(bào)道。平板抑菌試驗(yàn)表明fvv4菌株發(fā)酵液可以顯著提高化學(xué)藥劑的抑菌效果，田間試驗(yàn)表明fvv4菌株發(fā)酵液和化學(xué)農(nóng)藥混配的防效高于化學(xué)藥劑，明顯起到減藥增效的作用。fvv4菌株發(fā)酵液減藥增效的作用也為首次發(fā)現(xiàn)。
28、生物保藏說明
29、生物材料：fvv4，分類命名：產(chǎn)紫籃狀菌（talaromyces?purpureogenus），于2025年04月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏中心地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)?中國科學(xué)院微生物研究所；保藏編號(hào)為cgmcc?no.?41911。
30、本申請中所述fvv4即為上述保藏編號(hào)為cgmcc?no.?41911的菌株。
1.產(chǎn)紫籃狀菌（talaromyces?purpureogenus），其特征在于，保藏編號(hào)為cgmcc?no.41911。
2.發(fā)酵液，其特征在于，其為權(quán)利要求1所述的產(chǎn)紫籃狀菌的發(fā)酵液。
3.如權(quán)利要求2所述的發(fā)酵液，其特征在于，制備方法包括：將權(quán)利要求1所述的產(chǎn)紫籃狀菌接種于pdb培養(yǎng)，將得到的培養(yǎng)液過濾，取濾液，得到發(fā)酵液。
4.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵液，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為26~30℃、轉(zhuǎn)速為160~200?rpm、時(shí)間為5~9天。
5.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵液，其特征在于，所述過濾的濾膜孔徑為0.22?μm。
6.產(chǎn)紫籃狀菌或發(fā)酵液在以下任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
7.組合物，其特征在于，包含：
8.產(chǎn)紫籃狀菌、發(fā)酵液或組合物在制備防治玉米大斑病的生防制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)紫籃狀菌為權(quán)利要求1所述的產(chǎn)紫籃狀菌，所述發(fā)酵液為權(quán)利要求2至5任一項(xiàng)所述的發(fā)酵液，所述組合物為權(quán)利要求7所述的組合物。
9.生防制劑，其特征在于，包含以下任一項(xiàng)：
10.防治玉米大斑病的方法，其特征在于，使用以下任一項(xiàng)：