本發(fā)明屬于疾病檢測試劑領(lǐng)域，具體涉及一種檢測標志物的試劑在制備卵巢癌診斷產(chǎn)品或預后評價產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、卵巢癌現(xiàn)有臨床診療手段在早期篩查靈敏度、預后監(jiān)測時效性方面存在顯著不足，亟需通過解析卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子調(diào)控機制，開發(fā)新型生物標志物以實現(xiàn)早期診斷和精準預后評估。

2、近年研究表明，piwi相互作用rna(pirna)作為一類24-31nt小分子非編碼rna，越來越多的研究報道了pirna作為生物標志物用于癌癥診斷及預后預測的臨床應(yīng)用。研究表明，pirna在乳腺癌、宮頸癌等多種婦科腫瘤中呈現(xiàn)顯著表達異常及調(diào)控作用(例如pir-36712通過sepw1p/microrna競爭機制抑制乳腺癌進展，pir-14633通過m6a修飾調(diào)控促進宮頸癌轉(zhuǎn)移)。然而，卵巢癌中pirna的整體表達譜尚未系統(tǒng)解析，現(xiàn)有研究僅報道pir-52207、pir-33733等個別pirna對癌細胞惡性表型的調(diào)控作用，且發(fā)揮功能的生物學機制尚不清楚。

3、作為一種小分子非編碼rna，pirna在人體循環(huán)系統(tǒng)中的表達相對穩(wěn)定，無論是血漿、血清或胃液中均可檢測。因此，作為一種非侵入性標志物，pirna在癌癥早期篩查、鑒別診斷以及預后預測方面具有巨大潛力，且已有研究證實其在乳腺癌、胃癌等腫瘤血清中的診斷價值，但目前缺乏對卵巢癌患者循環(huán)系統(tǒng)(如血清)中pirna表達特征及其臨床價值的探索，導致該領(lǐng)域存在以下技術(shù)空白：①pirna作為卵巢癌患者非侵入性液體活檢標志物的可行性未驗證；②卵巢癌特異性pirna標志物體系未建立；③與臨床特征(如治療狀態(tài)、腫瘤分期、轉(zhuǎn)移狀態(tài)、生存預后等)的關(guān)聯(lián)性完全未知。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明基于多中心大規(guī)模隊列樣本發(fā)現(xiàn)并驗證pirna(以下也稱pir-hsa-8111406)在卵巢癌與卵巢良性病變及對照組患者血清表達具有顯著統(tǒng)計學差異，pir-hsa-8111406在卵巢癌中高表達，而在正常人和卵巢良性病變中血清pir-hsa-8111406表達水平極低，與卵巢癌患者血清pir-hsa-8111406水平相比，差異顯著并區(qū)分良好，其診斷效能優(yōu)于現(xiàn)有標志物ca-125，cea，ca19-9，he4，roma等，且在卵巢癌早期患者中診斷效能優(yōu)異，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌的診斷標志物用于卵巢癌的早期診斷應(yīng)用。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在卵巢癌血清中表達量的高低與卵巢癌患者的治療狀態(tài)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)，臨床分期以及生存預后時間相關(guān)，pir-hsa-8111406高表達組卵巢癌患者預后較差，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌預后評價的標志物用于卵巢癌預后評價。此外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)相較于其他多種盆腔惡性腫瘤，pir-hsa-8111406僅在卵巢癌中表達水平升高，并且pir-hsa-8111406在卵巢癌組織表達水平相較于癌旁組織更高，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌特異性的標志物。最后，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)標志物pir-hsa-8111406穩(wěn)定性優(yōu)異，在保存5年及以上的血清樣本中仍能表現(xiàn)出良好診斷效能。

2、為了達到上述目的，本發(fā)明可以采用以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明一方面提供一種檢測標志物的試劑在制備卵巢癌診斷產(chǎn)品或預后評價產(chǎn)品中的應(yīng)用，標志物為pirna，pirna的序列如seq?id?no：1所示(gccgccggtgaaataccactacacat)。

4、優(yōu)選地，上述應(yīng)用中，檢測標志物的試劑選自基于光電化學法檢測的試劑、基于量子點納米傳感器法檢測的試劑、基于電化學發(fā)光法檢測的試劑、基于dnazyme檢測的試劑或基于qrt-pcr檢測的試劑。

5、更優(yōu)選地，上述應(yīng)用中，檢測標志物的試劑為基于qrt-pcr檢測的試劑，檢測標志物的試劑包括pirna引物、探針、緩沖液、逆轉(zhuǎn)錄酶或taq?dna聚合酶中的一種或多種。

6、優(yōu)選地，上述應(yīng)用中，pirna來自受試者血清。

7、優(yōu)選地，上述應(yīng)用中，診斷產(chǎn)品或預后評價產(chǎn)品為試劑或試劑盒。

8、本發(fā)明具有以下有益效果：

9、(1)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在卵巢癌與卵巢良性病變及健康對照組血清表達具有顯著統(tǒng)計學差異，pir-hsa-8111406在卵巢癌中高表達，而在正常人和卵巢良性病變中血清pi?r-hsa-8111406表達水平極低，與卵巢癌患者血清pir-hsa-8111406水平相比差異顯著并區(qū)分良好。

10、(2)本發(fā)明基于血清pirna建立的卵巢癌診斷模型的roc曲線下面積(area?underth?e?roc?curve，auc)為0.902，靈敏度為0.844，特異度為0.767，準確率為0.804，且其診斷效能，靈敏度，陰性預測值均優(yōu)于現(xiàn)有臨床常用腫瘤標志物ca-125，cea，ca19-9，he?4，roma等，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌的診斷標志物，用于卵巢癌的診斷應(yīng)用。

11、(3)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在早期卵巢癌與卵巢良性病變及對照組患者血清表達具有顯著統(tǒng)計學差異，pir-hsa-8111406在早期卵巢癌中高表達，而在正常人和卵巢良性病變中血清pir-hsa-8111406表達水平極低，與卵巢癌患者血清pir-hsa-8111406水平相比差異顯著并區(qū)分良好，本發(fā)明基于血清pirna建立的卵巢癌早期診斷模型的auc值為0.854，優(yōu)于臨床常用腫瘤標志物ca-125(auc值為0.815)，能夠有效地區(qū)分早期卵巢惡性腫瘤患者與卵巢良性病變及健康對照，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌的診斷標志物用于卵巢癌的早期診斷應(yīng)用。

12、(4)本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在卵巢癌血清中表達量的高低與卵巢癌患者的治療狀態(tài)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)，臨床分期以及生存預后均相關(guān)，pir-hsa-8111406高表達組卵巢癌患者預后較差，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌預后評價的標志物用于卵巢癌預后評價。

13、(5)本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406特異性在卵巢癌血清中高表達，而在其他多種盆腔惡性腫瘤血清中低表達，因此pir-hsa-8111406可作為器官特異性的卵巢癌血清標志物用于卵巢癌診斷，監(jiān)測，預后評價。

14、(6)本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在凍存5年以上的血清樣本中仍能表現(xiàn)出良好診斷效能，因此pir-hsa-8111406可作為卵巢癌穩(wěn)定的標志物用于卵巢癌診斷，監(jiān)測，預后評價。

15、(7)本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406特異性在卵巢癌組織中高表達，而在癌旁組織中低表達，因此pir-hsa-8111406可作為器官特異性的卵巢癌標志物。

16、(8)本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)pir-hsa-8111406在多中心獨立外部驗證隊列(河南省腫瘤醫(yī)院和山西省腫瘤醫(yī)院)中相較于對照組表達更高，因此pir-hsa-8111406對于卵巢癌的診斷效能穩(wěn)健且可靠。