背景技術(shù)：
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現(xiàn)：當(dāng)將本公開(kāi)的針對(duì)產(chǎn)甲烷菌細(xì)胞表面抗原或其片段(例如抗原片段、表位)的疫苗(例如核酸疫苗)施用于反芻動(dòng)物時(shí)，其出奇有效地誘導(dǎo)針對(duì)產(chǎn)甲烷菌的免疫反應(yīng)和抗體產(chǎn)生，并且減少了反芻動(dòng)物中的甲烷產(chǎn)生。
2、以前曾嘗試使用冷凍干燥或甲醛殺死的產(chǎn)甲烷菌或細(xì)胞壁部分來(lái)對(duì)反芻動(dòng)物接種疫苗。雖然這種疫苗接種誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的抗體反應(yīng)，但疫苗接種僅顯示體內(nèi)甲烷減少至多8％，這主要是因?yàn)楫a(chǎn)甲烷菌上存在的免疫優(yōu)勢(shì)抗原并不代表作為產(chǎn)甲烷菌生長(zhǎng)和/或甲烷產(chǎn)生的抗體介導(dǎo)的中和的靶標(biāo)的抗原。
3、本公開(kāi)的疫苗采用靶向方法，針對(duì)至少一種產(chǎn)甲烷菌的至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段(例如抗原片段、表位)，有效中和該產(chǎn)甲烷菌，從而提高疫苗的特異性和有效性。
1.一種疫苗，其包含至少一種編碼至少一種產(chǎn)甲烷菌的至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段(例如抗原片段，例如包含表位的片段，例如包含細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域或其部分的片段)的核酸。
2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其中所述至少一種產(chǎn)甲烷菌屬于甲烷桿菌科。
3.如權(quán)利要求1或2所述的疫苗，其中所述至少一種產(chǎn)甲烷菌屬于選自以下的屬：甲烷短桿菌屬、甲烷球形菌屬、甲烷微菌屬、甲烷桿菌屬、甲烷粒菌屬、甲烷鬃菌屬、甲烷袋狀菌屬、甲烷八疊球菌屬和熱原體目，任選地為甲烷短桿菌屬、甲烷微菌屬和甲烷八疊球菌屬。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種產(chǎn)甲烷菌包括甲酸甲烷桿菌、布氏甲烷桿菌、瘤胃甲烷短桿菌、米勒甲烷短桿菌、奧蕾氏甲烷短桿菌、運(yùn)動(dòng)甲烷微菌、奧倫唐沼澤甲烷袋狀菌、巴氏甲烷八疊球菌、牛甲烷短桿菌、北京甲烷桿菌、黑海甲烷袋狀菌、布雷斯甲烷袋狀菌、馬氏甲烷八疊球菌、熱原體目古細(xì)菌brna1、戈氏甲烷短桿菌、共存甲烷短桿菌、史氏甲烷短桿菌、斯塔特曼甲烷球形菌、布氏擬甲烷球菌、嗜冷甲烷葉菌r15、沼澤甲烷桿菌、伊氏甲烷鹽菌、荷蘭甲烷嗜熱嗜甲基菌、蘇氏甲烷絲菌、沃坎甲烷熱球菌、茲氏甲烷咸菌、拉布雷亞甲烷粒菌、甲酸甲烷胞菌、黑海甲烷袋狀菌、水稻甲烷菌、布雷斯甲烷袋狀菌、石油甲烷葉形菌、亨氏甲烷螺菌、居泥甲烷盤(pán)菌、馬氏甲烷嗜鹽菌、嗜熱甲烷球菌、沼澤甲烷小球菌、熱甲烷熱球菌、詹氏甲烷熱球菌、甲烷熱球菌屬的種fs406-22、布恩甲烷胞菌、甲烷短桿菌屬的種abm4、瘤胃甲烷短桿菌、甲烷球形菌屬、甲酸甲烷桿菌、絨毛甲烷熱球菌、巴氏甲烷八疊球菌、沼澤甲烷桿菌、火紅色甲烷菌、甲酸甲烷菌、地獄甲烷熱球菌、工業(yè)污水甲烷袋菌、沖繩甲烷嗜熱球菌、史氏甲烷短桿菌、甲烷短桿菌屬、康萊德氏甲烷菌、熱自養(yǎng)甲烷嗜熱球菌、馬氏甲烷球菌、馬氏甲烷球菌、萬(wàn)氏甲烷球菌、熾熱甲烷嗜熱菌、乙酸甲烷八疊球菌、馬氏甲烷八疊球菌、竹節(jié)狀甲烷鬃菌6ac、馬氏甲烷球菌、沃氏甲烷球菌、緩慢甲烷繩菌、嗜冷甲烷葉菌、竹節(jié)狀甲烷鬃菌或其任意組合。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種產(chǎn)甲烷菌包括瘤胃甲烷短桿菌和/或戈氏甲烷短桿菌。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述疫苗是單價(jià)的。
7.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述疫苗是多價(jià)的，任選地其中所述疫苗包含至少一種編碼瘤胃甲烷短桿菌和戈氏甲烷短桿菌的至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段的核酸。
8.如權(quán)利要求7所述的疫苗，其中所述疫苗包含至少一種編碼至少2、3、4、5、6、7、8、9或10種多肽(例如，一種細(xì)胞表面蛋白或多種細(xì)胞表面蛋白的多肽；或其片段)的核酸。
9.如權(quán)利要求7或8所述的疫苗，其中所述疫苗包含至少一種編碼至少15、20、30、40、50或100種多肽(例如，一種細(xì)胞表面蛋白或多種細(xì)胞表面蛋白的多肽；或其片段)的核酸。
10.如權(quán)利要求8或9所述的疫苗，其中所述多肽來(lái)自至少2、3、4、5、6、7、8、9或10種產(chǎn)甲烷菌。
11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種核酸編碼多聯(lián)體多肽。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段包括黏附素樣蛋白、具有半胱氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域的黏附素樣蛋白、四氫甲烷蝶呤s-甲基轉(zhuǎn)移酶亞基、其片段和/或其任意組合。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段包含與表2a、表2b、表3、表19、表20、表21中所示的氨基酸序列或其片段的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種核酸包含與表2a、表2b、表3、表19、表20、表21中所示的核苷酸序列或其片段的至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
15.如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種核酸經(jīng)過(guò)密碼子優(yōu)化以在反芻動(dòng)物中表達(dá)，任選地經(jīng)過(guò)密碼子優(yōu)化以在家牛中表達(dá)。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中至少一種核酸是脫氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種核酸是dna。
18.如權(quán)利要求17所述的疫苗，其中所述dna包含編碼序列和非編碼序列。
19.如權(quán)利要求17或18所述的疫苗，其中所述dna可操作地連接至啟動(dòng)子。
20.如權(quán)利要求19所述的疫苗，其中所述啟動(dòng)子選自cmv啟動(dòng)子、cag啟動(dòng)子、scp啟動(dòng)子、cmve-scp、cmvmax、jet、pgk、ef-1a、ahsp啟動(dòng)子、mnd啟動(dòng)子、wiskott-aldrich啟動(dòng)子和pklr啟動(dòng)子。
21.如權(quán)利要求17-20中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna包含：
22.如權(quán)利要求17-21中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna還包含
23.如權(quán)利要求17-22中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna是線性的或環(huán)狀的。
24.如權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna是雙鏈的或單鏈的。
25.如權(quán)利要求17-24中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna是單鏈的并且包含至少一個(gè)發(fā)夾。
26.如權(quán)利要求17-24中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna是雙鏈的并且包含端粒序列(例如閉合線性dna，例如dbdnatm)。
27.如權(quán)利要求17-26中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna包含至少一種化學(xué)修飾。
28.如權(quán)利要求27所述的疫苗，其中至少一種化學(xué)修飾是末端修飾，其存在于5′端和/或3′端。
29.如權(quán)利要求27或28所述的疫苗，其中所述至少一種化學(xué)修飾包括硫代磷酸酯、三乙二醇(teg)、鎖核酸(lna，2′-氧-4′-碳亞甲基鍵聯(lián))、六乙二醇(sp18)、1，3-丙二醇(spc3)、2′-o-甲氧基乙基(moe)核糖核苷酸、2′-o-甲基核糖核苷酸(2′-ome)、2′-氟(2′-f)核苷酸或其任意組合。
30.如權(quán)利要求29所述的疫苗，其中所述至少一種化學(xué)修飾包括至少五個(gè)連續(xù)的硫代磷酸酯鍵。
31.如權(quán)利要求29或30的疫苗，其中所述至少一種化學(xué)修飾包括至少三個(gè)連續(xù)的2′-o-甲基核苷和/或2′-o-甲氧基乙基核苷。
32.如權(quán)利要求17-31中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna位于載體中。
33.如權(quán)利要求32所述的疫苗，其中所述載體是質(zhì)粒。
34.如權(quán)利要求17-33中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述dna被包裝在病毒中，例如aav，例如?？苿?dòng)物aav(例如用于轉(zhuǎn)導(dǎo)至受試者)。
35.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述至少一種核酸是rna(例如mrna)。
36.如權(quán)利要求35所述的疫苗，其中所述rna包含5′帽。
37.如權(quán)利要求35或36所述的疫苗，其中所述rna包含具有至少一種化學(xué)修飾的5′帽。
38.如權(quán)利要求35-37中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述5′末端帽選自：
39.如權(quán)利要求35-38中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含5′utr。
40.如權(quán)利要求39所述的疫苗，其中所述5′utr包含二級(jí)結(jié)構(gòu)。
41.如權(quán)利要求39所述的疫苗，其中所述5′utr不包含二級(jí)結(jié)構(gòu)。
42.如權(quán)利要求39-41中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中5′utr包含kozak序列和/或至少一個(gè)翻譯增強(qiáng)子元件(tee)。
43.如權(quán)利要求42所述的疫苗，其中所述tee包含內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(ires)。
44.如權(quán)利要求39-43中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述5′utr包含與以下項(xiàng)具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的核酸序列：
45.如權(quán)利要求35-44中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含3′utr。
46.如權(quán)利要求45所述的疫苗，其中所述3′utr包含二級(jí)結(jié)構(gòu)。
47.如權(quán)利要求45所述的疫苗，其中所述3′utr不包含二級(jí)結(jié)構(gòu)。
48.如權(quán)利要求45-47中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述3′utr包含至少一個(gè)翻譯增強(qiáng)子元件(tee)和/或莖環(huán)(例如組蛋白莖環(huán))。
49.如權(quán)利要求45-48中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述3′utr包含與表4b中列出的3′utr中的任一個(gè)具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的核酸序列。
50.如權(quán)利要求35-49中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含polya尾或多聚腺苷酸化信號(hào)。
51.如權(quán)利要求50所述的疫苗，其中所述polya尾長(zhǎng)至少50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150bp。
52.如權(quán)利要求50或51所述的疫苗，其中所述polya尾長(zhǎng)約100-150bp。
53.如權(quán)利要求50-52中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述polya尾包含接頭(例如，中斷polya尾的接頭)。
54.如權(quán)利要求53所述的疫苗，其中所述接頭包含序列ugc或其多個(gè)(例如，ugc接頭的多個(gè)拷貝)。
55.如權(quán)利要求35-54中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含編碼信號(hào)肽的序列，任選地其中所述序列編碼選自表5a和表5c中所列出的信號(hào)肽的信號(hào)肽。
56.如權(quán)利要求35-55中任一項(xiàng)的疫苗，其中所述rna包含編碼跨膜(tm)結(jié)構(gòu)域的序列和/或編碼胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的序列，任選地其中所述序列編碼選自表5b和表5c中所列出的那些的跨膜結(jié)構(gòu)域和/或胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。
57.如權(quán)利要求35-56中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含：
58.如權(quán)利要求35-57中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中至少一種產(chǎn)甲烷菌的所述至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段被表達(dá)為胞質(zhì)蛋白、分泌蛋白或膜栓系蛋白。
59.如權(quán)利要求35-58中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含至少一種化學(xué)修飾。
60.如權(quán)利要求59所述的疫苗，其中所述化學(xué)修飾在編碼至少一種產(chǎn)甲烷菌的至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段的序列中。
61.如權(quán)利要求35-60中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含至少一種選自以下的化學(xué)修飾：吡啶-4-酮核糖核苷、5-氮雜-尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代尿苷、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羥基尿苷、3-甲基尿苷、5-羧甲基-尿苷、1-羧甲基-假尿苷、5-炔丙基-尿苷、1-炔丙基-假尿苷、5-牛磺酸甲基尿苷、1-?；撬峒谆?假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿苷、1-牛磺酸甲基-4-硫代-尿苷、5-甲基-尿苷、1-甲基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、2，硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-脫氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-脫氮-假尿苷、二氫尿苷、二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2，甲氧基尿苷、2-甲氧基-4-硫代-尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、5-氮雜-胞苷、假異胞苷、3-甲基-胞苷、n4-乙酰胞苷、5-甲酰胞苷、n4-甲基胞苷、5-羥甲基胞苷、1-甲基-假異胞苷、吡咯并-胞苷、吡咯并-假異胞苷、2-硫代-胞苷、2-硫代-5-甲基-胞苷，4-硫代-假異胞苷、4-硫代-1-甲基-假異胞苷、4-硫代-1-甲基-1-脫氮-假異胞苷、1-甲基-1-脫氮-假異胞苷、澤布拉林、5-氮雜-澤布拉林、5-甲基-澤布拉林、5-氮雜-2-硫代-澤布拉林、2-硫代-澤布拉林、2-甲氧基-胞苷、2-甲氧基，5-甲基-胞苷、4-甲氧基-假異胞苷、4-甲氧基-1-甲基-假異胞苷、2-氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、7-脫氮-腺嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-腺嘌呤、7-脫氮-2-氨基嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-2-氨基嘌呤、7-脫氮-2,6-二氨基嘌呤、7-脫氮-8-氮雜-2,6-二氨基嘌呤、1-甲基腺苷、n6-甲基腺苷、n6-異戊烯基腺苷、n6-(順式-羥基異戊烯基)腺苷、2-甲硫基-n6-(順式-羥基異戊烯基)腺苷、n6-甘氨酰氨基甲酰腺苷、n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷、2-甲硫基-n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷、n6,n6-二甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、2-甲硫基腺嘌呤和2-甲氧基腺嘌呤、肌苷、1，甲基肌苷、懷俄苷、懷丁苷、7-脫氮-鳥(niǎo)苷、7-脫氮-8-氮雜-鳥(niǎo)苷、6-硫代-鳥(niǎo)苷、6-硫代-7-脫氮-鳥(niǎo)苷、6-硫代-7-脫氮-8-氮雜-鳥(niǎo)苷、7-甲基-鳥(niǎo)苷、6-硫代-7-甲基-鳥(niǎo)苷、7-甲基肌苷、6-甲氧基-鳥(niǎo)苷、1-甲基鳥(niǎo)苷、n2-甲基鳥(niǎo)苷、n2,n2-二甲基鳥(niǎo)苷、8-氧代，鳥(niǎo)苷、7-甲基-8-氧代-鳥(niǎo)苷、1，甲基-6-硫代-鳥(niǎo)苷、n2-甲基-6-硫代-鳥(niǎo)苷和n2,n2-二甲基-6-硫代-鳥(niǎo)苷，及其任意組合。
62.如權(quán)利要求35-61中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述rna包含在編碼至少一種產(chǎn)甲烷菌的至少一種細(xì)胞表面蛋白或其片段的序列中的至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的尿嘧啶中的化學(xué)修飾。
63.如權(quán)利要求62所述的疫苗，其中所述化學(xué)修飾在所述尿嘧啶的5位。
64.如權(quán)利要求62或63所述的疫苗，其中所述至少一種化學(xué)修飾選自由以下組成的組：假尿苷、n1-甲基假尿苷、’2-硫代尿苷、4′-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫代-1-甲基-1-脫氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲氧基尿苷和2′-o-甲基尿苷。
65.如權(quán)利要求62-64中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述化學(xué)修飾包括n1-甲基假尿苷。
66.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的疫苗，以及至少一種載體和/或至少一種賦形劑。
67.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物，其中所述疫苗被配制在脂質(zhì)或鹽水中。
68.如權(quán)利要求66或67所述的藥物組合物，其中所述疫苗被配制在脂質(zhì)中。
69.如權(quán)利要求67或68所述的藥物組合物，其中所述核酸(例如，dna或rna)與總脂質(zhì)的比率為至少約0.05(重量/重量)。
70.如權(quán)利要求67-69中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述疫苗被配制在脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物或脂質(zhì)納米顆粒中。
71.如權(quán)利要求70所述的藥物組合物，其中所述疫苗被配制在脂質(zhì)納米顆粒中。
72.如權(quán)利要求70或71所述的藥物組合物，其中所述疫苗被配制在脂質(zhì)納米顆粒中，所述脂質(zhì)納米顆粒包含可電離脂質(zhì)、輔助脂質(zhì)、peg化脂質(zhì)、結(jié)構(gòu)脂質(zhì)(例如固醇)或其任意組合。
73.如權(quán)利要求70-72中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)納米顆粒包含可電離脂質(zhì)、輔助脂質(zhì)、peg化脂質(zhì)和結(jié)構(gòu)脂質(zhì)(例如固醇)。
74.如權(quán)利要求72或73所述的藥物組合物，其中：
75.如權(quán)利要求70-74中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)納米顆粒具有約20-60％可電離脂質(zhì)：約5-25％輔助脂質(zhì)：約25-55％結(jié)構(gòu)脂質(zhì)的摩爾比率；和約0.5-15％peg化脂質(zhì)。
76.如權(quán)利要求70-75中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)納米顆粒具有約50％可電離脂質(zhì)：約10％輔助脂質(zhì)：約38.5結(jié)構(gòu)脂質(zhì)的摩爾比率；和約1.5％peg化脂質(zhì)。
77.如權(quán)利要求72-76中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述可電離脂質(zhì)包括2，2-二亞油基-4-二甲基氨基乙基-[1，3]-二氧戊環(huán)(dlin-kc2-dma)、二亞油基-甲基-4-二甲基氨基丁酸酯(dlin-mc3-dma)、二((z)-壬-2-烯-1-基)9-((4-(二甲氨基)丁?；?氧基)十七烷二酸酯(l319)、4-羥基丁基)氮烷二基)雙(己烷-6，1-二基)雙(2-己基癸酸酯(alc-0315)、sm-102、a18-iso5-2dc18、a6、306oi10，或其任意組合。
78.如權(quán)利要求72-77中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述peg化脂質(zhì)包括(2-[(聚乙二醇)-2000]-n，n-雙十四烷基乙酰胺(peg2000-dma(也稱(chēng)為alc-0159))；和/或聚乙二醇2000二肉豆蔻酰甘油(peg2000-dmg)。
79.如權(quán)利要求72-78中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述輔助脂質(zhì)包括1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(dspc)和/或1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)。
80.如權(quán)利要求72-79中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述結(jié)構(gòu)脂質(zhì)包括：膽固醇、β-谷甾醇、20α-羥基膽固醇、固醇或其任意組合。
81.如權(quán)利要求70-80中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)納米顆粒包含sm-102、聚乙二醇2000二肉豆蔻酰甘油(peg2000-dmg)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(dspc)和膽固醇。
82.如權(quán)利要求70-80中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)納米顆粒包含((4-羥基丁基)氮烷二基)雙(己烷-6，1-二基)雙(2-己基癸酸酯)、2-(聚乙二醇2000)-n,n-雙十四烷基乙酰胺(peg2000-dma)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(dspc)和膽固醇。
83.如權(quán)利要求66-82中任一項(xiàng)所述的藥物組合物,其還包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、磷酸氫二鈉二水合物、蔗糖或其任意組合。
84.如權(quán)利要求66-82中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含氨丁三醇，鹽酸氨丁三醇，蔗糖或其任意組合。
85.如權(quán)利要求70-84中任一項(xiàng)所述的藥物組合物,其中所述納米顆粒具有：
86.如權(quán)利要求66-85中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含佐劑。
87.如權(quán)利要求86所述的藥物組合物，其中所述佐劑包括皂苷、montanide?isa61、殼聚糖熱凝膠、脂質(zhì)納米顆粒/陽(yáng)離子脂質(zhì)體佐劑或其任意組合。
88.如權(quán)利要求86或87所述的藥物組合物，其中所述佐劑包括montanide?isa61。
89.如權(quán)利要求66-88中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其還包含轉(zhuǎn)染促進(jìn)化合物。
90.如權(quán)利要求89所述的藥物組合物，其中所述轉(zhuǎn)染促進(jìn)化合物包括(±)-n-(2-羥乙基)-n,n-二甲基-2,3-雙(十四烷基氧基)-1-丙銨溴化物)(dmrie)。
91.一種誘導(dǎo)反芻動(dòng)物中針對(duì)至少一種產(chǎn)甲烷菌的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向所述反芻動(dòng)物施用權(quán)利要求1-62中任一項(xiàng)所述的疫苗，或權(quán)利要求66-90中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
92.如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述免疫反應(yīng)包括b細(xì)胞反應(yīng)和/或t細(xì)胞反應(yīng)。
93.一種降低反芻動(dòng)物的腸道中產(chǎn)甲烷菌的活性、數(shù)量和/或類(lèi)型的方法，所述方法包括向所述反芻動(dòng)物施用權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的疫苗，或權(quán)利要求66-90中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
94.一種減少由反芻動(dòng)物產(chǎn)生的甲烷的量的方法，所述方法包括向所述反芻動(dòng)物施用權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的疫苗，或權(quán)利要求66-93中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
95.如權(quán)利要求91-94中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物產(chǎn)生針對(duì)至少一種產(chǎn)甲烷菌的抗體。
96.如權(quán)利要求95所述方法，其中所述抗體是igg或iga，優(yōu)選iga。
97.如權(quán)利要求95或96所述的方法，其中所述抗體以足夠的量產(chǎn)生以：
98.如權(quán)利要求91-97中任一項(xiàng)所述的方法，其中與對(duì)照相比，所述方法使所述反芻動(dòng)物的甲烷產(chǎn)生減少至少約1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。
99.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述對(duì)照是公認(rèn)的參考值，或者是未接種疫苗的反芻動(dòng)物中甲烷產(chǎn)生的量。
100.如權(quán)利要求91-99中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述疫苗或所述藥物組合物通過(guò)選自肌肉內(nèi)施用、皮內(nèi)施用、皮下施用和鼻腔施用的途徑施用于所述反芻動(dòng)物。
101.如權(quán)利要求91-100中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用至少一次劑量的所述疫苗或藥物組合物。
102.如權(quán)利要求91-101中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用至少一次或兩次重復(fù)劑量的所述疫苗或藥物組合物(例如，加強(qiáng)劑量)。
103.如權(quán)利要求102所述的方法，其中在從向所述反芻動(dòng)物施用前一劑量的所述疫苗的時(shí)間起至少約2周、1個(gè)月、6個(gè)月或12個(gè)月后向所述反芻動(dòng)物施用重復(fù)劑量的所述疫苗或藥物組合物。
104.如權(quán)利要求102或103所述的方法，其中在從向所述反芻動(dòng)物施用前一劑量的所述疫苗的時(shí)間起不超過(guò)約3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月或24個(gè)月向所述反芻動(dòng)物施用重復(fù)劑量的所述疫苗或藥物組合物。
105.如權(quán)利要求102-104中任一項(xiàng)所述的方法，其中在從向所述反芻動(dòng)物施用前一劑量的所述疫苗的時(shí)間起至少約2周并且不超過(guò)約18個(gè)月后，所述反芻動(dòng)物接受重復(fù)劑量的所述疫苗。
106.如權(quán)利要求102-105中任一項(xiàng)所述的方法，其中在從向所述反芻動(dòng)物施用前一劑量的所述疫苗的時(shí)間起至少約4周并且不超過(guò)約12個(gè)月后，所述反芻動(dòng)物接受重復(fù)劑量的所述疫苗。
107.如權(quán)利要求91-106中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用介于1ug/kg和400ug/kg之間的劑量的所述核酸疫苗。
108.如權(quán)利要求91-107中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用包含至少約25ug、50ug、100ug、150ug、200ug、250ug或300ug的rna的核酸劑量。
109.如權(quán)利要求91-108中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用包含至少約100ug的核酸劑量。
110.如權(quán)利要求91-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用包含至少約200ug的核酸劑量。
111.如權(quán)利要求91-110中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用包含至少約300ug的核酸劑量。
112.如權(quán)利要求91-111中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述反芻動(dòng)物施用至少一種降低由所述反芻動(dòng)物產(chǎn)生的甲烷的水平的劑。
113.如權(quán)利要求112所述的方法，其中將所述至少一種劑在所述疫苗接種的同時(shí)、之前或之后施用于所述反芻動(dòng)物。
114.如權(quán)利要求112或113所述的方法，其中將所述至少一種劑在所述疫苗接種之后施用于所述反芻動(dòng)物。
115.如權(quán)利要求112-114中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述至少一種劑每天、每半周、每周、每雙周(每?jī)芍?或每月施用于所述反芻動(dòng)物。
116.如權(quán)利要求112-115中任一項(xiàng)的方法，其中將所述至少一種劑施用于反芻動(dòng)物，持續(xù)時(shí)間為至少1周但不超過(guò)1個(gè)月。
117.如權(quán)利要求112至116中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種劑選自：
118.如權(quán)利要求112-117中任一項(xiàng)所述的方法，其中至少一種劑是3-nop或乙基-3nop。
119.如權(quán)利要求118所述的方法，其中每天向所述反芻動(dòng)物施用至少約0.5g但不超過(guò)25g的3-nop。
120.如權(quán)利要求118或119所述的方法，其中每天向所述反芻動(dòng)物施用至少約1g但不超過(guò)5g的3-nop。
121.如權(quán)利要求118-120中任一項(xiàng)所述的方法，其中每天向所述反芻動(dòng)物施用約2.5g的3-nop。
122.如權(quán)利要求118-121中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用3-nop持續(xù)時(shí)間為至少1周但不超過(guò)1個(gè)月。
123.如權(quán)利要求112-122中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種劑被配制在動(dòng)物飼料中。
124.如權(quán)利要求112所述的方法，其中所述至少一種劑是包含一種或多種減少一種或多種有害大氣氣體和/或其前體的產(chǎn)生的小分子和一種或多種農(nóng)業(yè)上合適的載體的組合物。
125.如權(quán)利要求124所述的方法，其中所述一種或多種農(nóng)業(yè)上合適的載體包括固體載體。
126.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述一種或多種固體載體包括凹凸棒石、高嶺石、漂白土、碳酸鈣、珍珠巖、硅藻土、硅酸鈣、粉煤灰、多糖、二糖、單糖、樹(shù)膠、其天然或合成衍生物或其組合。
127.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述一種或多種固體載體包括凹凸棒石、高嶺石、漂白土、碳酸鈣、珍珠巖、硅藻土、硅酸鈣、粉煤灰、多糖、二糖、單糖、樹(shù)膠、二氧化硅、丙二醇、大麻蛋白、生物炭、蒙脫石、活性炭、木質(zhì)素、木粉、大麻蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白、明膠、酪蛋白、殼聚糖、滑石粉、磷酸鈣、精氨酸、賴(lài)氨酸、碳酸鈣、碳黑、谷氨酰胺、甜菜堿、磷酸鉍、檸檬酸鉍、磷酸鐵或其任意組合。
128.如權(quán)利要求125-127中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種固體載體包括糖，包括纖維素、黃原膠、刺梧桐樹(shù)膠、乙基纖維素、肌醇、半乳糖、阿拉伯糖、乳糖、乳果糖、甘露醇、甘露糖、山梨糖、松二糖、帕拉金糖或其組合。
129.如權(quán)利要求125-127中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種固體載體包括糖，包括纖維素、黃原膠、刺梧桐樹(shù)膠、乙基纖維素、肌醇、半乳糖、阿拉伯糖、乳糖、乳果糖、甘露醇、甘露糖、山梨糖、松二糖、帕拉金糖、角叉菜膠、乙酸纖維素、羥丙基纖維素、乙酸纖維素鄰苯二甲酸酯、麥芽糊精、葡聚糖、菊粉、玉米淀粉、支鏈淀粉、羥基乙酸淀粉鈉、季戊四醇、環(huán)糊精或其組合。
130.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中固體載體包含二氧化硅和乙基纖維素。
131.如權(quán)利要求130所述的方法，其中所述載體包含約10重量％至約50重量％的二氧化硅和約50重量％至約90重量％的乙基纖維素。
132.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含二氧化硅和活性炭。
133.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含約10重量％至約90重量％的二氧化硅和約10重量％至約90重量％的活性炭。
134.如權(quán)利要求133中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體還包含精氨酸、賴(lài)氨酸、或精氨酸和賴(lài)氨酸兩者。
135.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含活性炭和乙基纖維素。
136.如權(quán)利要求135所述的方法，其中所述載體包含約10重量％至約50重量％的活性炭和約40重量％至約90重量％的乙基纖維素。
137.如權(quán)利要求135或136所述的方法，其中所述載體還包含約1重量％至約10重量％的木質(zhì)素硫酸鈉或約1重量％至約10重量％的羥乙基纖維素。
138.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含精氨酸和聚己內(nèi)酯。
139.如權(quán)利要求138所述的方法，其中所述載體包含約10重量％至約60重量％的精氨酸和約30重量％至約90重量％的聚己內(nèi)酯。
140.如權(quán)利要求124-129中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體包含二氧化硅和聚己內(nèi)酯。
141.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述載體包含約10重量％至約60重量％的二氧化硅和約30重量％至約90重量％的聚己內(nèi)酯。
142.如權(quán)利要求125-141中任一項(xiàng)所述的方法，其中一種或多種固體載體是惰性的。
143.如權(quán)利要求125-142中任一項(xiàng)所述的方法，其中一種或多種固體載體是水溶性的。
144.如權(quán)利要求124-143中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括一種或多種密度大于水的添加劑和/或一種或多種降低所述組合物在水中溶解速率的添加劑。
145.如權(quán)利要求144所述的方法，其中所述組合物具有至少1.1mg/ml，優(yōu)選約1.1mg/ml至約3mg/ml、約1.5mg/ml至約3mg/ml、約1.5mg/ml至約2.5mg/ml、或約1.5mg/ml至約2mg/ml的密度。
146.如權(quán)利要求144或145所述的方法，其中所述一種或多種密度大于水的添加劑包括二氧化硅、凹凸棒石、高嶺石、漂白土、碳酸鈣、珍珠巖、硅藻土、硅酸鈣、粉煤灰或其任意組合。
147.如權(quán)利要求144-146中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述降低所述組合物的溶解速率的一種或多種添加劑進(jìn)一步降低所述一種或多種小分子釋放到水中的速率。
148.如權(quán)利要求147所述的方法，其中所述組合物在至少約1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84、91、98、105、112、119、126、133、140和/或不超過(guò)約2、3、4、5、6、7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84、91、98、105、112、119、126、133、140或147天、約1至約147天，更優(yōu)選地7-63天，更優(yōu)選地約7-42天，甚至更優(yōu)選地14-42天，還甚至更優(yōu)選地14-28天內(nèi)溶解。
149.如權(quán)利要求124-148中任一項(xiàng)所述的方法，其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或其前體的產(chǎn)生的所述小分子的約40％至約80％在15天后釋放到水中。
150.如權(quán)利要求124-149中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述組合物包含具有均勻尺寸分布的顆粒。
151.如權(quán)利要求124-150中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述組合物包含具有非均勻尺寸分布的顆粒。
152.如權(quán)利要求150或151所述的方法，其中所述顆粒包含球形、正方形、矩形、膠囊形、圓柱形、圓錐形、卵形、三角形、菱形或盤(pán)形形狀。
153.如權(quán)利要求124-152中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述顆粒具有范圍為約1mm至約20mm、約1mm至約15mm、約1mm至約10mm、約5mm至約20mm、約5mm至約15mm或約5mm至約10mm的大小。
154.如權(quán)利要求124-153中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述顆粒還包含包衣。
155.如權(quán)利要求154所述的方法，其中所述包衣包含至少兩層。
156.如權(quán)利要求154或155所述的方法，其中所述包衣選自乙酸纖維素鄰苯二甲酸酯、乙基纖維素、羥丙基纖維素、聚己內(nèi)酯、海藻酸鹽、殼聚糖、聚乙二醇、乙酸纖維素、三乙酸甘油酯、丙二醇、n-甲基-2-吡咯烷酮及其任意組合。
157.如權(quán)利要求154或155所述的方法，其中所述包衣包含兩種或更多種聚電解質(zhì)。
158.如權(quán)利要求157所述方法，其中所述聚電解質(zhì)包括聚苯乙烯磺酸鹽、聚乙烯亞胺、木質(zhì)素硫酸鈉、聚谷氨酸和聚-l-賴(lài)氨酸、聚-l-精氨酸、聚丙烯胺鹽酸鹽、聚丙烯酸或其任意組合。
159.如權(quán)利要求158所述的方法，其中所述聚電解質(zhì)包括聚丙烯胺鹽酸鹽和木質(zhì)素硫酸鈉。
160.如權(quán)利要求158所述的方法，其中所述聚電解質(zhì)包括聚丙烯胺鹽酸鹽和聚苯乙烯磺酸鹽。
161.如權(quán)利要求158所述的方法，其中所述聚電解質(zhì)包括木質(zhì)素硫酸鈉和聚谷氨酸和聚-l-賴(lài)氨酸或聚-l-精氨酸中的一種，以及木質(zhì)素硫酸鈉。
162.如權(quán)利要求158所述的方法，其中所述聚電解質(zhì)包括聚苯乙烯磺酸鹽以及聚谷氨酸和聚-l-賴(lài)氨酸或聚-l-精氨酸中的一種。
163.如權(quán)利要求157-162中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述兩種或更多種聚電解質(zhì)是交聯(lián)的。
164.如權(quán)利要求124-163中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種小分子包括干擾乙酸鹽、h2、co2、甲醇、一甲胺、二甲胺、三甲胺、一氧化氮或其組合的攝取和/或轉(zhuǎn)化的分子。
165.如權(quán)利要求124-164中任一項(xiàng)所述的方法，其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的所述一種或多種小分子與選自由以下組成的組的酶相互作用：3-(甲硫基)丙酸：輔酶m甲基轉(zhuǎn)移酶、乙酸激酶、乙酰輔酶a脫羰基酶、乙酰輔酶a脫羰基酶/合酶復(fù)合物α2ε2、乙酰輔酶a脫羰基酶/合酶復(fù)合物β、乙酰輔酶a脫羰基酶/合酶復(fù)合物γδ、乙酰輔酶a合酶、一氧化碳脫氫酶、碳酸酐酶、co-甲基轉(zhuǎn)移酶、輔酶m還原酶、環(huán)化水解酶、脫氫酶、二甲胺--[類(lèi)咕啉蛋白]co-甲基轉(zhuǎn)移酶、f420依賴(lài)性亞甲基-h4mpt還原酶、f420依賴(lài)性亞甲基-h4spt脫氫酶、甲酰甲烷呋喃脫氫酶、甲酰甲烷呋喃：h4mpt甲酰轉(zhuǎn)移酶、甲酰甲烷呋喃：h4spt甲酰轉(zhuǎn)移酶、甲酰轉(zhuǎn)移酶、h2形成亞甲基-h4mpt脫氫酶、甲醇-5-羥基苯并咪唑鈷胺酰胺co-甲基轉(zhuǎn)移酶、亞甲基-h4mpt環(huán)化水解酶、甲基-輔酶m還原酶、甲基-h4spt：com甲基轉(zhuǎn)移酶、甲基化[甲胺特異性類(lèi)咕啉蛋白]：輔酶m甲基轉(zhuǎn)移酶、甲基鈷胺酰胺：com甲基轉(zhuǎn)移酶、甲硫醇：輔酶m甲基轉(zhuǎn)移酶、甲基轉(zhuǎn)移酶、mtac蛋白：輔酶m甲基轉(zhuǎn)移酶、磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶、四氫甲烷蝶呤s-甲基轉(zhuǎn)移酶、四甲基銨甲基轉(zhuǎn)移酶、三甲胺--類(lèi)咕啉蛋白co-甲基轉(zhuǎn)移酶和其任意組合。
166.如權(quán)利要求165所述的方法，其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的所述一種或多種小分子與甲基輔酶m還原酶(mcr)相互作用。
167.如權(quán)利要求124-166中任一項(xiàng)所述的方法，其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的所述一種或多種小分子包括具有式r1-[ch2]n-ono2的化合物，其中
168.如權(quán)利要求167所述的方法，其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的所述一種或多種小分子選自3-硝基氧丙醇、9-硝基氧壬醇、5-硝基氧戊酸、6-硝基氧己酸、雙(2-羥乙基)胺二硝酸鹽、1，4-雙硝基氧丁烷、1，5-雙硝基氧戊烷及其任意組合。
169.如權(quán)利要求167所述的方法,其中減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的所述一種或多種小分子包括3-硝基氧丙醇(3-nop)。
170.如權(quán)利要求124-169中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述組合物包含約1重量％至約25重量％的所述小分子、約5重量％至約20重量％的所述小分子或約5重量％至約15重量％的所述小分子。
171.如權(quán)利要求124-170中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述組合物包含多個(gè)顆粒群，其中每個(gè)群或顆粒包含不同的制劑、不同的形狀和/或不同的大小分布。
172.如權(quán)利要求171所述的方法,其中所述多個(gè)顆粒群包括第一群和第二群。
173.如權(quán)利要求172所述的方法，其中所述顆粒狀顆粒群還包括至少1、2、3、4、5、5、6、8或9個(gè)和/或不超過(guò)4、5、6、7、8、9或10個(gè)額外群，例如3-10個(gè)額外群，優(yōu)選3-7個(gè)額外群，更優(yōu)選3-5個(gè)額外群。
174.如權(quán)利要求172或173所述的方法，其中所述第一群包含立即釋放制劑。
175.如權(quán)利要求172-174中任一項(xiàng)所述的方法，其中第二群包含延遲釋放制劑。
176.如權(quán)利要求173-175中任一項(xiàng)所述的方法，其中每個(gè)附加群包含延遲釋放制劑，其中每個(gè)群在與每個(gè)其他群不同的時(shí)間溶解和/或釋放一種或多種減少一種或多種有害大氣氣體和/或前體的產(chǎn)生的小分子。
177.通過(guò)權(quán)利要求91-176中任一項(xiàng)所述的方法產(chǎn)生的抗體,或其片段。
178.如權(quán)利要求177所述的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
179.如權(quán)利要求177或178所述的抗體，其中所述抗體是igg或iga，優(yōu)選iga。
180.如權(quán)利要求177-179中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是凍干的。
181.如權(quán)利要求177-180中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體在包含至少一種賦形劑和/或載體的藥物組合物中。
182.由權(quán)利要求91-176中任一項(xiàng)所述的反芻動(dòng)物產(chǎn)生的乳汁和/或其衍生物。
183.如權(quán)利要求182所述的乳汁和/或其衍生物，其中所述乳汁和/或其衍生物包含結(jié)合至少一種產(chǎn)甲烷菌的抗體。
184.如權(quán)利要求182或183所述的乳汁和/或其衍生物，其中所述乳汁和/或其衍生物經(jīng)過(guò)巴氏殺菌和/或均質(zhì)化。
185.如權(quán)利要求182-184中任一項(xiàng)所述的乳汁和/或其衍生物，其中將所述乳汁和/或其衍生物凍干或蒸發(fā)以形成干乳粉(例如在低溫下低壓煮沸)。
186.如權(quán)利要求182-185中任一項(xiàng)所述的乳汁和/或其衍生物，其還包含至少一種減少反芻動(dòng)物中甲烷產(chǎn)生的劑，任選地其中所述至少一種劑選自表8b中的劑。
187.一種動(dòng)物飼料，其包含：
188.如權(quán)利要求187所述的動(dòng)物飼料，其中所述動(dòng)物飼料是液體(例如飲用水、乳汁)或固體(例如粗飼料)。
189.如權(quán)利要求187或188所述的動(dòng)物飼料，其中所述動(dòng)物飼料包含脂肪和/或脂肪酸，任選地其中所述動(dòng)物飼料包含占飲食的至少約1％、2％、3％、4％、5％或6％的脂肪和/或脂肪酸。
190.一種減少反芻動(dòng)物中甲烷產(chǎn)生的方法，所述方法包括向所述反芻動(dòng)物口服施用和/或飼喂權(quán)利要求177-181中任一項(xiàng)所述的抗體、權(quán)利要求182-186中任一項(xiàng)所述的乳汁和/或其衍生物、權(quán)利要求187-189中任一項(xiàng)所述的動(dòng)物飼料、或其中兩種或更多種的任意組合。
191.如權(quán)利要求190所述的方法，其進(jìn)一步包括施用至少一種減少反芻動(dòng)物中甲烷產(chǎn)生的劑，任選地其中所述至少一種劑選自表8b中的劑。
192.如權(quán)利要求190或191所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述反芻動(dòng)物施用權(quán)利要求1-65中任一項(xiàng)所述的至少一種疫苗或權(quán)利要求66-90中任一項(xiàng)所述的至少一種藥物組合物。
193.如權(quán)利要求91-176和190-192中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物選自母牛、公牛、野牛、牦牛、水牛、羚羊、山羊、綿羊、鹿、長(zhǎng)頸鹿、馴鹿、瞪羚、大袋鼠、美洲駝、駱駝和羊駝。
194.如權(quán)利要求91-176和190-193中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物是成年反芻動(dòng)物。
195.如權(quán)利要求91-176和190-193中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物是幼年反芻動(dòng)物(例如斷奶前或2歲以下)。
196.如權(quán)利要求91-176和190-193中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物是妊娠雌性反芻動(dòng)物。
197.如權(quán)利要求91-176和190-193中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反芻動(dòng)物是接受了包含結(jié)合至少一種產(chǎn)甲烷菌的抗體的乳汁的已接種疫苗的雌性反芻動(dòng)物的后代(例如，小牛)。
198.如權(quán)利要求91-176和190-197中任一項(xiàng)所述的方法，其中向所述反芻動(dòng)物施用所述疫苗作為所述反芻動(dòng)物所經(jīng)受的預(yù)先存在的疫苗接種計(jì)劃的一部分(例如，表8a)。
199.如權(quán)利要求91-176和190-198中任一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)使所述反芻動(dòng)物經(jīng)受至少一種其它疫苗或接受至少一種其它疫苗時(shí)向所述反芻動(dòng)物施用所述疫苗，其中所述至少一種其它疫苗針對(duì)傳染性牛科動(dòng)物鼻氣管炎(ibr)、?？苿?dòng)物病毒性腹瀉(bvd)、副流感病毒-3(pi3)、牛科動(dòng)物呼吸道合胞病毒(brsv)、梭菌屬、大腸桿菌乳腺炎、鉤端螺旋體病、溶血性曼氏桿菌、布魯氏菌屬、弧菌病、彎曲桿菌屬、毛滴蟲(chóng)屬、毛滴蟲(chóng)病、輪狀病毒、冠狀病毒和/或呼吸道疾病。
200.如權(quán)利要求91-176和190-197中任一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)所述反芻動(dòng)物更換主人和/或環(huán)境時(shí)向所述反芻動(dòng)物施用疫苗。
201.如權(quán)利要求91-176和190-200中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疫苗減少反芻動(dòng)物下腸道(下腸)中的甲烷產(chǎn)生。
202.如權(quán)利要求201所述的方法，其中所述方法導(dǎo)致所述反芻動(dòng)物產(chǎn)生的甲烷水平減少至少約1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，任選地其中將甲烷水平的所述減少與未處理的反芻動(dòng)物進(jìn)行比較。