本發(fā)明涉及的是熒光探針領(lǐng)域，特別涉及一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、生物硫醇(如谷胱甘肽、半胱氨酸等)作為生物體內(nèi)重要的活性小分子，不僅參與調(diào)控蛋白質(zhì)的構(gòu)象與功能、維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)，還在細(xì)胞增殖、凋亡及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其濃度異常與多種病理狀態(tài)(如神經(jīng)退行性疾病、癌癥和心血管疾病)密切相關(guān)，因此精準(zhǔn)檢測(cè)生物硫醇對(duì)疾病機(jī)制研究和臨床診斷具有重要意義。
2、目前常用的生物硫醇檢測(cè)技術(shù)包括高效液相色譜法(hplc)、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及電化學(xué)傳感等。盡管這些方法具備定量準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)，但其在應(yīng)用過程中普遍存在明顯局限性：大型儀器的購置與維護(hù)成本高昂、檢測(cè)流程涉及復(fù)雜的樣品預(yù)處理(如衍生化反應(yīng)或色譜柱純化)、對(duì)操作人員專業(yè)技術(shù)要求苛刻，且難以實(shí)現(xiàn)生物體系的原位實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。這些問題嚴(yán)重制約了其在活體研究和臨床快速檢測(cè)中的應(yīng)用前景。
3、相較之下，熒光分析法憑借其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)成為近年來的研究熱點(diǎn)。該方法通過設(shè)計(jì)特異性響應(yīng)硫醇的熒光探針，可在生理?xiàng)l件下實(shí)現(xiàn)高靈敏度(檢測(cè)限可達(dá)納摩爾級(jí))、高選擇性(區(qū)分不同硫醇分子)的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)。更重要的是，其非侵入性特點(diǎn)與優(yōu)異生物相容性，使其能夠突破傳統(tǒng)檢測(cè)手段的局限，直接應(yīng)用于活細(xì)胞、組織乃至模式生物的實(shí)時(shí)成像，為揭示硫醇在疾病發(fā)生發(fā)展中的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。這一特性使熒光分析技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究和精準(zhǔn)診療開發(fā)領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用潛力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是要解決上述現(xiàn)有技術(shù)中的問題，而提供一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針。
2、一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，熒光探針由azamonardine產(chǎn)物與丙烯酰氯化合而成，熒光探針的分子結(jié)構(gòu)式為
3、優(yōu)選的，所述azamonardine產(chǎn)物由間苯二酚和鹽酸多巴胺化合而成，azamonardine產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)式為
4、優(yōu)選的，所述azamonardine產(chǎn)物的具體合成路線如下
5、
6、優(yōu)選的，所述熒光探針的的具體合成路線如下
7、
8、一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
9、步驟一、將間苯二酚(440.44mg，4.00mmol)和鹽酸多巴胺(758.56mg，4.00mmol)放入500ml燒杯中，加入250ml超純水并將固體攪拌溶解后，將ph調(diào)到11，室溫和空氣條件下劇烈攪拌24h，反應(yīng)結(jié)束后，將ph調(diào)至中性，再用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用超純水洗滌三遍后干燥，去除溶劑得到亮黃色aza產(chǎn)品(128mg產(chǎn)率10.7％)；
10、步驟二、取aza(100.00mg，0.39mmol)放入5ml干燥的反應(yīng)瓶中，用橡膠塞密封系統(tǒng)并將反應(yīng)裝置放到通風(fēng)櫥中，向系統(tǒng)注入2ml無水dmf，攪拌將aza溶解后，將反應(yīng)裝置放到冰浴中，并向瓶中注入無水三乙胺(200μl，1.43mmol)，攪拌均勻后再注入丙烯酰氯(100μl，1.23mmol)，將裝置移至室溫繼續(xù)反應(yīng)6h后，通過真空油泵除去dmf，對(duì)粗產(chǎn)物進(jìn)行快速柱層析純化(dcm/乙酸乙酯＝25:1)，得到亮黃色產(chǎn)物aza-acryl(92mg，產(chǎn)率65.2％)；
11、一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針的測(cè)試方法，將探針分子溶解在pbs緩沖液(20.0mm，ph＝7.4)中，室溫下進(jìn)行測(cè)試，具體實(shí)施方法在實(shí)施實(shí)例中詳細(xì)介紹；
12、一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針在生物硫醇檢測(cè)當(dāng)中的應(yīng)用，熒光探針在pbs緩沖液(20.0mm，ph＝7.4)中有微弱的熒光，與生物硫醇響應(yīng)后的熒光發(fā)射峰在468nm處。
13、本發(fā)明的有益效果：
14、本發(fā)明的探針分子合成路線簡單，成本較低，有很弱的熒光，與生物硫醇響應(yīng)后溶液發(fā)綠光，可以于純水體系中快速識(shí)別生物硫醇，同時(shí)也能夠在細(xì)胞中快速識(shí)別并定量檢測(cè)生物硫醇，靈敏度高、選擇性好、抗干擾能力強(qiáng)，本發(fā)明的熒光探針在生物化學(xué)領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
1.一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，其特征在于：熒光探針由azamonardine產(chǎn)物與丙烯酰氯化合而成，熒光探針的分子結(jié)構(gòu)式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，其特征在于：所述azamonardine產(chǎn)物由間苯二酚和鹽酸多巴胺化合而成，azamonardine產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)式為
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，其特征在于：所述azamonardine產(chǎn)物的具體合成路線如下
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，其特征在于：所述熒光探針的的具體合成路線如下
5.一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針的制備方法，用于合成權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針，其特征在于：包括以下步驟：
6.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針的測(cè)試方法，其特征在在于：將探針分子溶解在pbs緩沖液(20.0mm，ph＝7.4)中，室溫下進(jìn)行測(cè)試，具體實(shí)施方法在實(shí)施實(shí)例中詳細(xì)介紹。
7.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述一種檢測(cè)生物硫醇的熒光探針在生物硫醇檢測(cè)當(dāng)中的應(yīng)用，其特征在在于：熒光探針在pbs緩沖液(20.0mm，ph＝7.4)中有微弱的熒光，與生物硫醇響應(yīng)后的熒光發(fā)射峰在468nm處。