本發(fā)明涉及一種含微球和凝膠的組合物及其制備方法，屬于生物工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、運(yùn)用藥物、手術(shù)、醫(yī)療器械及其他具有創(chuàng)傷性或者不可逆性的醫(yī)學(xué)技術(shù)方法修復(fù)、再塑人的容貌及人體各部位形態(tài)的美容方式，在現(xiàn)今快節(jié)奏生活中成為高效、被廣泛接受的美容方式；將可吸收生物材料(填充物)注射于人體某部位，以改善、修飾皮膚皺紋、軟組織缺陷、輪廓等從而改善局部或整體形態(tài)等，具有操作方便、延緩衰老和美容效果明顯、恢復(fù)期短等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床。

2、注射填充物需要具有良好的有效性、安全性、物理穩(wěn)定性，也需要便捷的注射可操作性。如果一種注射用填充產(chǎn)品在注射過程中，極易堵針或沉降，需反復(fù)更換針頭或重復(fù)搖勻使之分散均勻，將帶來(lái)使用操作麻煩和使劑量不能精準(zhǔn)控制，嚴(yán)重影響注射的有效性和安全性。

3、透明質(zhì)酸，因其良好的生物相容性和安全性，常用于醫(yī)學(xué)美容中填充皺紋、修正面部輪廓等，透明質(zhì)酸體內(nèi)易被酶降解和水解，維持時(shí)間較短。因此，經(jīng)常將交聯(lián)透明質(zhì)酸替代未交聯(lián)的透明質(zhì)酸，用于醫(yī)學(xué)美容中。

4、羥基磷灰石(hap)是人體骨骼的主要無(wú)機(jī)組分，具有良好的生物相容性和生物活性，其與其他高分子形成的復(fù)合材料也已被廣泛應(yīng)用于軟/硬組織的填充和修復(fù)，如將羥基磷灰石和透明質(zhì)酸組合，用于醫(yī)學(xué)美容的填充等。但是，簡(jiǎn)單地復(fù)配/混合羥基磷灰石和交聯(lián)或未交聯(lián)的透明質(zhì)酸，容易導(dǎo)致羥基磷灰石分散不均勻，聚集沉降，導(dǎo)致注射過程中發(fā)生注射困難(如爆針，推擠不順滑，劑量不準(zhǔn)確)，或?qū)е伦⑸浜蟪霈F(xiàn)注射/治療部位產(chǎn)生不良反應(yīng)，如紅腫、異常隆起等。

5、以上所述的這些材料，雖常用于作為填充劑中的成分，配以其他輔料，以發(fā)揮支撐、即時(shí)填充和刺激膠原蛋白再生等作用，但如何將各種材料及其他輔料配制成既保證充分發(fā)揮各組分的作用，達(dá)到更多的希望的功能，又保證具有分散性好，不易聚集沉降，注射性好，使用方便，支撐性強(qiáng)，副作用小，安全性高等特性，仍然具有極大的研究難度和是臨床應(yīng)用迫切需要和期望的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于目前存在的問題和需求，本發(fā)明提供了一種可注射的含凝膠和羥基磷灰石微球的組合物，所述組合物，分散均勻，不易發(fā)生聚集沉降，易推注，具有較高的粘彈性，極低的溶脹性，較強(qiáng)的內(nèi)聚性，注射后不易發(fā)生移位，具有較好的支撐作用和機(jī)械穩(wěn)定性，可避免因材料的高溶脹性而引起的機(jī)械性能下降、壓迫周圍生物組織等不良反應(yīng)的缺陷，能夠刺激促進(jìn)膠原蛋白再生，并且副作用低，可以作為填充材料或醫(yī)療器械用于需要改善皮膚健康狀態(tài)，人體外觀形狀、輪廓等的有需要的部位或其他有需要的部位。

2、由此，本發(fā)明提供一種組合物，其包括：凝膠和羥基磷灰石微球；所述凝膠包括：經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)的交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽，游離透明質(zhì)酸或其鹽，緩沖鹽和水。

3、所述羥基磷灰石微球的平均粒徑可以為20μm-80μm。所述羥基磷灰石微球，優(yōu)選破碎率不超過其總量的0.3％，有利于發(fā)揮作用同時(shí)減少不良反應(yīng)。

4、在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的平均粒徑為20μm-60μm。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的平均粒徑為20μm-30μm，有利于發(fā)揮作用同時(shí)減少不良反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的平均粒徑為25μm-45μm，有利于發(fā)揮作用同時(shí)減少不良反應(yīng)。

5、所述羥基磷灰石微球的密度可以為0.5g/ml-1.9g/ml；微球密度過低，則體積較大，不利于組合物的推擠和粘彈性控制；微球密度過高，則易發(fā)生沉降，不能得到高含量的微球的組合物。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的密度為0.6g/ml-1.9g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的密度為0.6g/ml-0.9g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的密度為1.0g/ml-1.9g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述羥基磷灰石微球的密度為1.4g/ml-1.6g/ml。

6、基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量可以為10％-57％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，可促進(jìn)膠原蛋白再生和/或增加體積、改善塑造外形或輪廓。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為10％-50％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為10％-45％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為10％-35％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為15％-35％，有利于促進(jìn)膠原蛋白再生和/或增加體積、改善塑造外形或輪廓，同時(shí)具有較好的使用便捷性和體驗(yàn)感。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為20％-30％，如25％，或30％，更有利于注射使用、刺激促進(jìn)膠原蛋白再生和改善體積。

7、在一些實(shí)施方案中，基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積可以為組合物總體積的20％-40％。在一些實(shí)施方案中，基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積優(yōu)選為組合物總體積的25％-35％。在一些實(shí)施方案中，基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積優(yōu)選為組合物總體積的28％-33％。在一些實(shí)施方案中，基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積優(yōu)選為組合物總體積的30％-33％。

8、根據(jù)本發(fā)明，采用上述特性的羥基磷灰石微球，有助于組合物的分散均勻和不易發(fā)生分層、沉降，以及易推擠注射和使用便捷；并且，上述特性的羥基磷灰石微球，可高效地保證組合物的安全性、有效性及穩(wěn)定性，不易發(fā)生紅腫、結(jié)節(jié)等不良反應(yīng)，更早、更快地起到促進(jìn)膠原蛋白再生的作用。

9、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物中，交聯(lián)或游離透明質(zhì)酸或其鹽，其分子量獨(dú)立地可以為50萬(wàn)道爾頓-280萬(wàn)道爾頓。在一些實(shí)施方式中，交聯(lián)或游離透明質(zhì)酸或其鹽的分子量獨(dú)立地為100萬(wàn)道爾頓-260萬(wàn)道爾頓。在一些實(shí)施方式中，交聯(lián)或游離透明質(zhì)酸或其鹽的分子量獨(dú)立地為110萬(wàn)，120萬(wàn)，130萬(wàn)，150萬(wàn)，165萬(wàn)，180萬(wàn)，205萬(wàn)，215萬(wàn)或235萬(wàn)道爾頓。在一些實(shí)施方式中，交聯(lián)或游離透明質(zhì)酸或其鹽獨(dú)立地為高、低分子量的透明質(zhì)酸或其鹽的組合。

10、基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))可以為43％-90％，有利于微球分散均勻，刺激膠原蛋白再生和組合物的注射推注。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為45％-90％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為50％-90％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為60％-90％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為65％-85％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為65％-80％。在一些實(shí)施方式中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述組合物中，所述凝膠的含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為65％-75％，有利于微球分散均勻，刺激膠原蛋白再生和組合物的注射推注。

11、根據(jù)本發(fā)明，所述凝膠中，透明質(zhì)酸或其鹽的總含量可以為10mg/g-28mg/g。在一些實(shí)施方式中，所述凝膠中，透明質(zhì)酸或其鹽的總含量可以為15mg/g-28mg/g。在一些實(shí)施方式中，所述凝膠中，透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為16mg/g，17mg/g，18mg/g，19mg/g，20mg/g，21mg/g，22mg/g，23mg/g或25mg/g。

12、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物中，游離透明質(zhì)酸或其鹽的含量低于5mg/g，過高多的游離透明質(zhì)酸或其鹽，將使組合物更易被降解，填充支撐時(shí)間易下降。在一些實(shí)施方式中，所述組合物中，游離透明質(zhì)酸或其鹽的含量低于3mg/g。在一些實(shí)施方式中，所述組合物中，游離透明質(zhì)酸或其鹽的含量低于2mg/g。在一些實(shí)施方式中，所述組合物中，游離透明質(zhì)酸或其鹽的含量低于1mg/g或0.5mg/g。

13、根據(jù)本發(fā)明，制備所述組合物的原料中，所述交聯(lián)劑體積與透明質(zhì)酸或其鹽的重量之投料比可以為50μl/g-120μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑體積與透明質(zhì)酸或其鹽的重量之投料比為55μl/g-100μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸或其鹽的投料體積質(zhì)量比優(yōu)選為60μl/g-100μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸或其鹽的投料體積質(zhì)量比優(yōu)選為60μl/g-90μl/g。

14、本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，使用上述特性的羥基磷灰石微球，配以上述特性的凝膠，可以使組合物分散均勻，且穩(wěn)定不易發(fā)生聚集或沉降現(xiàn)象，注射時(shí)易推擠和操作，具有較好的穩(wěn)定性、通針性和使用便捷性。

15、所述緩沖鹽可以為磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，氯化鉀和氯化鈉中的一種或多種。上述緩沖鹽，可以使所述組合物具有適宜注射使用的ph值和/或適宜的滲透壓，從而適于注射使用。在一些實(shí)施方式中，所述緩沖鹽為磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的混合物。在一些實(shí)施方式中，所述緩沖鹽為磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉和氯化鈉的混合物。

16、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物，其滲透壓可以在200mosmol/kg-400mosmol/kg。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的滲透壓在270mosmol/kg-350mosmol/kg，或者在300mosmol/kg-330mosmol/kg。

17、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物，其ph可以在6.0-7.6。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的ph在6.5-7.6。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的ph在6.8-7.6。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的ph在6.8-7.4。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的ph在7.0-7.2。

18、所述組合物，還可以含有局部麻醉劑(例如，利多卡因，鹽酸利多卡因)，激素，生長(zhǎng)因子，或它們的任意組合。

19、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物，還可以含有無(wú)機(jī)鈣鹽，如磷酸鈣，碳酸鈣，氯化鈣或它們的任意組合。

20、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物是易注射的，可以使用25g-27g的針頭注射。在一些實(shí)施方式中，所述組合物是通過普通醫(yī)用或美容用針例如27g針可注射的，通過針注射的注射速率可以是0.2ml/分鐘-1.5ml/分鐘、優(yōu)選在0.9ml/min與1.1ml/min之間，注射所需的力可適度變化。在一些實(shí)施方式中，當(dāng)通過27g針擠出時(shí)，使組合物從注射器中被推擠出所需的平均推擠力不超過60n(牛頓)；在一些實(shí)施方式中，當(dāng)通過27g針擠出時(shí)，使組合物從注射器中被推擠出所需的平均推擠力不超過55n；在一些實(shí)施方式中，所述的組合物，其通過27g針頭注射推擠時(shí)，平均推擠力不超過50n；在一些實(shí)施方式中，所述的組合物，其通過27g針頭注射推擠時(shí)，平均推擠力不超過45n。

21、根據(jù)本發(fā)明，所述組合物具有較低的溶脹度，其溶脹度低于15；較低的溶脹度，有利于組合物注射后保持較好的機(jī)械性能和較低的不良反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述組合物的溶脹度低于10。

22、所述組合物同時(shí)具有較好的粘彈性，在1hz其彈性模量g’高于500pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于1000pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于1500pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于2000pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于2500pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于2600pa。在一些實(shí)施方式中，所述組合物在1hz的彈性模量g’高于3000pa，較高的粘彈性，將有利于組合物保持較好的機(jī)械性能和較低的不良反應(yīng)。

23、在一些實(shí)施方案中，前述組合物包括：凝膠和羥基磷灰石微球；所述凝膠包括：經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉，游離透明質(zhì)酸鈉，緩沖鹽和水；所述交聯(lián)劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚，緩沖鹽為磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉和氯化鈉；所述凝膠中，透明質(zhì)酸鈉的總含量為15mg/g-25mg/g；并且，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量為15％-35％，或基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積為組合物總體積的25％-35％。

24、在一些實(shí)施方案中，前述組合物包括：凝膠和羥基磷灰石微球；所述凝膠由經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉，游離透明質(zhì)酸鈉，緩沖鹽和水構(gòu)成；所述交聯(lián)劑為1,4-丁二醇二縮水甘油醚，緩沖鹽為磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉和氯化鈉；所述凝膠中，透明質(zhì)酸鈉的總含量為15mg/g-25mg/g；并且，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量為15％-35％，或基于組合物的總體積計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的總體積為組合物總體積的25％-35％。

25、另外一方面，本發(fā)明提供了制備所述組合物的方法。

26、一種制備所述組合物的方法，包括：將第一透明質(zhì)酸或其鹽，氫氧化鈉，交聯(lián)劑和水混合，然后加入第一羥基磷灰石，反應(yīng)完畢；再加入第二透明質(zhì)酸或其鹽和第二羥基磷灰石，反應(yīng)完畢；再調(diào)節(jié)ph，任選使用緩沖鹽的溶液透析，定量；任選加入其他成分，混勻；再加入第三羥基磷灰石，混勻；任選滅菌，得到所述組合物。

27、所述交聯(lián)劑可以為1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，聚(乙二醇)二縮水甘油醚和乙二醇二縮水甘油醚中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明，在一些實(shí)施方案中，所述交聯(lián)劑優(yōu)選為1,4-丁二醇二縮水甘油醚。

28、所述制備組合物的方法中，所述交聯(lián)劑體積與第一透明質(zhì)酸或其鹽的重量投料之比可以為50μl/g-120μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑體積與第一透明質(zhì)酸或其鹽的重量投料之比為55μl/g-100μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑與第一透明質(zhì)酸或其鹽的體積質(zhì)量投料比優(yōu)選為600μl/g-1000μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑與第一透明質(zhì)酸或其鹽的體積質(zhì)量投料比優(yōu)選為600μl/g-900μl/g，有利于獲得高粘彈性和易推擠的凝膠。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑體積與第一透明質(zhì)酸或其鹽的重量投料之比為60μl/g-80μl/g。在一些實(shí)施方式中，所述交聯(lián)劑與第一透明質(zhì)酸或其鹽的體積質(zhì)量投料比為700μl/g，或800μl/g。

29、所述第一透明質(zhì)酸或其鹽在水中的濃度可以為0.01g/ml-1g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述第一透明質(zhì)酸或其鹽在水中的濃度優(yōu)選為0.05g/ml-0.5g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述第一透明質(zhì)酸或其鹽在水中的濃度優(yōu)選為0.05g/ml-0.3g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述第一透明質(zhì)酸或其鹽在水中的濃度優(yōu)選為0.05g/ml-0.2g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述第一透明質(zhì)酸或其鹽在水中的濃度優(yōu)選為0.05g/ml-0.15g/ml。

30、所述氫氧化鈉在水中的濃度可以為0.005g/ml-0.05g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述氫氧化鈉在水中的濃度為0.005g/ml-0.03g/ml。在一些實(shí)施方式中，所述氫氧化鈉在水中的濃度為0.008g/ml-0.02g/ml。

31、所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比可以為0.05:1-0.5:1。在一些實(shí)施方式中，所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比可以為0.1:1-0.3:1。在一些實(shí)施方式中，所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為0.12:1-0.2:1。

32、根據(jù)本發(fā)明，在一些實(shí)施方式中，基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石的投料量可以為羥基磷灰石的總重量的1％-30％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的2.5％-20％。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的5％-20％。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的2.5％-15％，有利于得到注射性能、粘彈性適宜填充注射的凝膠組合物。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的5％-15％，有利于得到注射性能、粘彈性適宜填充注射的凝膠組合物。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的2.5％-7.5％，有利于得到注射性能、粘彈性等多種性能適宜填充注射的凝膠組合物。在一些實(shí)施方式中，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％，有利于得到注射性能、粘彈性等多種性能適宜填充注射的凝膠組合物。

33、在一些實(shí)施方式中，基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石的投料量為羥基磷灰石的總重量的5％或7.5％。

34、根據(jù)本發(fā)明，在一些實(shí)施方式中，基于羥基磷灰石的總重量，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的1％-15％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2％-10％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2.5％-10％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2％-7.5％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2.5％-7.5％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2.5％-5％。在一些實(shí)施方式中，所述第二羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％。

35、根據(jù)本發(fā)明，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，可以在5℃-40℃條件下反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在10℃-35℃條件下反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在15℃-35℃條件下反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在20℃-30℃條件下反應(yīng)。

36、根據(jù)本發(fā)明，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，可以在5℃-40℃條件下反應(yīng)2小時(shí)-24小時(shí)，反應(yīng)完畢。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在15℃-35℃條件下反應(yīng)4小時(shí)-18小時(shí)，反應(yīng)完畢。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在15℃-30℃條件下反應(yīng)6小時(shí)-16小時(shí)，有利于獲得粘彈性、可注射性都比較適宜的組合物。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第一羥基磷灰石后，在15℃-25℃條件下反應(yīng)6小時(shí)-16小時(shí)，有利于獲得粘彈性、可注射性都比較適宜的組合物。

37、根據(jù)本發(fā)明，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，可以在5℃-45℃條件下反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，在15℃-35℃條件下反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，在20℃-30℃條件下反應(yīng)。

38、根據(jù)本發(fā)明，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，可以在5℃-45℃條件下反應(yīng)2小時(shí)-20小時(shí)，反應(yīng)完畢。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，在5℃-40℃條件下反應(yīng)2小時(shí)-12小時(shí)，反應(yīng)完畢。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，在15℃-35℃條件下反應(yīng)3小時(shí)-8小時(shí)，反應(yīng)完畢。在一些實(shí)施方式中，所述方法中，加入第二羥基磷灰石后，在20℃-25℃條件下反應(yīng)3小時(shí)-8小時(shí)，有利于獲得粘彈性、可注射性都比較適宜的組合物。

39、根據(jù)本發(fā)明，可以使用鹽酸，磷酸，乙酸或檸檬酸調(diào)節(jié)ph至6.0-7.6。在一些實(shí)施方式中，使用鹽酸調(diào)節(jié)ph至6.0-7.6。

40、在一些實(shí)施方式中，使用鹽酸調(diào)節(jié)ph至6.5-7.6。在一些實(shí)施方式中，使用鹽酸調(diào)節(jié)ph至6.8-7.4。

41、根據(jù)本發(fā)明，在一些實(shí)施方式中，可以使用1萬(wàn)-3萬(wàn)的分子截留量的透析袋在磷酸鹽緩沖溶液中透析。

42、在一些實(shí)施方式中，所述方法包括：將第一透明質(zhì)酸或其鹽，氫氧化鈉和水混合，攪拌，形成溶液，然后加入交聯(lián)劑，攪拌混合；再加入第一羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)完畢；然后加入第二透明質(zhì)酸或其鹽和第二羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)完畢；再使用酸調(diào)節(jié)ph至6.0-7.6，使用緩沖鹽的溶液透析，定量；任選加入其他成分，混勻；再加入第三羥基磷灰石，混勻；任選滅菌，得到所述組合物；其中，基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2％-7.5％；所述第二羥基磷灰石的質(zhì)量可以為羥基磷灰石的總重量的2％-7.5％；所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為0.05:1-0.5:1。

43、在一些實(shí)施方式中，所述方法包括：將第一透明質(zhì)酸或其鹽，氫氧化鈉和水混合，攪拌，形成溶液，然后加入交聯(lián)劑，攪拌混合；再加入第一羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)完畢；然后加入第二透明質(zhì)酸或其鹽和第二羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)完畢；再使用酸調(diào)節(jié)ph至6.0-7.6，使用緩沖鹽的溶液透析，定量；任選加入其他成分，混勻；再加入第三羥基磷灰石，混勻；任選滅菌，得到所述組合物；其中，基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％；所述第二羥基磷灰石的質(zhì)量可以為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％；所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為0.1:1-0.3:1。

44、根據(jù)本發(fā)明，可以使用緩沖鹽的溶液將凝膠定量至預(yù)設(shè)計(jì)量。在一些實(shí)施方式中，使用pbs溶液將凝膠定量。

45、在一些實(shí)施方式中，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為10mg/g-28mg/g，基于組合物中的凝膠(即不包括微球)的質(zhì)量計(jì)算。在一些實(shí)施方式中，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為15mg/g-25mg/g，基于組合物中的凝膠的質(zhì)量計(jì)算。在一些實(shí)施方式中，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為16mg/g-23mg/g，基于組合物中的凝膠的質(zhì)量計(jì)算。在一些實(shí)施方式中，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為23mg/g，基于組合物中的凝膠的質(zhì)量計(jì)算。

46、在一些實(shí)施方式中，所述方法包括：將第一透明質(zhì)酸或其鹽，氫氧化鈉和水混合，攪拌，形成溶液，然后加入交聯(lián)劑，攪拌混合；再加入第一羥基磷灰石，在15℃-35℃反應(yīng)2小時(shí)-18小時(shí)，反應(yīng)完畢；然后加入第二透明質(zhì)酸或其鹽和第二羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)2小時(shí)-12小時(shí)，反應(yīng)完畢；再使用鹽酸調(diào)節(jié)ph至6.5-7.6，使用緩沖鹽的溶液透析、定量，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為10mg/g-28mg/g，基于組合物中的凝膠的質(zhì)量計(jì)算；任選加入局部麻醉劑或其他成分，混勻；再加入第三羥基磷灰石，混勻；滅菌，得到所述組合物；其中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量為10％-57％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))；基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的2％-7.5％，所述第二羥基磷灰石的質(zhì)量可以為羥基磷灰石的總重量的2％-7.5％；所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為0.05:1-0.5:1。

47、在一些實(shí)施方式中，所述方法包括：將第一透明質(zhì)酸或其鹽，氫氧化鈉和水混合，攪拌，形成溶液，然后加入交聯(lián)劑，攪拌混合；再加入第一羥基磷灰石，在15℃-35℃反應(yīng)2小時(shí)-18小時(shí)，反應(yīng)完畢；然后加入第二透明質(zhì)酸或其鹽和第二羥基磷灰石，在15℃-40℃反應(yīng)2小時(shí)-12小時(shí)，反應(yīng)完畢；再使用鹽酸調(diào)節(jié)ph至6.5-7.6，使用緩沖鹽的溶液透析、定量，定量至透明質(zhì)酸或其鹽的總含量為10mg/g-28mg/g，基于組合物中的凝膠的質(zhì)量計(jì)算；任選加入局部麻醉劑或其他成分，混勻；再加入第三羥基磷灰石，混勻；滅菌，得到所述組合物；其中，基于組合物的總重量計(jì)算，所述羥基磷灰石微球的含量為10％-57％(質(zhì)量分?jǐn)?shù))；基于羥基磷灰石的總重量，所述第一羥基磷灰石可以為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％，所述第二羥基磷灰石的質(zhì)量可以為羥基磷灰石的總重量的5％-7.5％；所述第二透明質(zhì)酸或其鹽與第一透明質(zhì)酸或其鹽的質(zhì)量比為0.1:1-0.3:1。

48、在一些實(shí)施方式中，使用無(wú)菌原料在無(wú)菌生產(chǎn)條件下制備前述的組合物。

49、在一些實(shí)施方式中，通過濕熱滅菌方式滅菌，獲得滅菌的組合物。在一些實(shí)施方式中，在121℃濕熱滅菌15min，獲得滅菌的組合物。在一些實(shí)施方式中，在129℃濕熱滅菌2min，獲得滅菌的組合物。

50、在一些實(shí)施方式中，使用輻照滅菌的方式滅菌，獲得滅菌的組合物。在一些實(shí)施方式中，使用不超過20kgy劑量的伽馬射線在-70℃-0℃輻照滅菌。在一些實(shí)施方式中，使用不超過15kgy劑量的伽馬射線輻照滅菌。在一些實(shí)施方式中，使用伽馬射線以2kgy-15kgy劑量在-70℃～0℃輻照滅菌，得到組合物。在一些實(shí)施方式中，使用伽馬射線以2kgy-12kgy劑量在-70℃～-20℃輻照滅菌，得到組合物。

51、本發(fā)明提供的組合物，可通過注射器注射到體內(nèi)或應(yīng)用于有需要的部位，發(fā)揮填充支持作用或其他需要的作用，并且具有改善的溶脹特性，內(nèi)聚力特性，高耐酶解特性和粘彈特性等，使之更有利于細(xì)胞的黏附、增殖，更有利于用于填充和刺激膠原蛋白再生，改善皮膚、身體外形、輪廓等狀態(tài)。