本申請涉及化學分析領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測植物中37種酚類物質(zhì)的hplc方法。
背景技術(shù)：
1、酚類物質(zhì)是植物體內(nèi)廣泛存在的一類次生代謝產(chǎn)物，具有多種生物學活性。根據(jù)其化學結(jié)構(gòu)的不同，酚類物質(zhì)可以分為黃酮類、酚酸類、單寧類、木脂素類等。其中黃酮類又可以被細分成黃烷醇、黃酮醇、黃酮、異黃酮、黃烷酮和花青素。這些化合物普遍存在于水果、蔬菜、茶葉、咖啡、紅酒、堅果以及其他植物性食品中。酚類物質(zhì)的主要生理活性在于其直接的抗氧化作用。隨著研究的進行，酚類物質(zhì)也被證明對心血管健康、認知功能改善、抗癌、抗糖尿病等方面具有潛在有益作用。
2、酚類物質(zhì)不僅在提高食品的營養(yǎng)價值方面具有重要意義，其在食品安全、功能性食品開發(fā)等領(lǐng)域中的應(yīng)用也備受關(guān)注，如酚類物質(zhì)作為天然染料、天然防腐劑、生物活性膜以及益生元等應(yīng)用的開發(fā)都具有了大量研究。除食品工業(yè)外，酚類物質(zhì)也被討論應(yīng)用于化妝品工業(yè)、紡織工業(yè)等。植物多酚的含量、種類和分布情況直接影響植物源食品的質(zhì)量和功能。因此，酚類物質(zhì)的快速、高效檢測不僅是食品質(zhì)量評估的重要指標，也為酚類物質(zhì)應(yīng)用與開發(fā)提供了重要依據(jù)。
3、植物多酚的定性和定量檢測方法經(jīng)歷了多年的發(fā)展，常見的檢測技術(shù)包括分光光度法、液相色譜法(lc)、氣相色譜法(gc)和質(zhì)譜法(ms)等。其中，分光光度法僅適用于總酚含量的快速檢測，不能分析酚類物質(zhì)單體的含量；氣相色譜法由于需要繁瑣的衍生化處理且酚類物質(zhì)普遍揮發(fā)性有限等原因使其較少的應(yīng)用于植物多酚的檢測。液相色譜法是最常用的多酚檢測手段，其可以與紫外檢測器(uv)、光電二極管陣列檢測(pda)以及熒光檢測器(fld)聯(lián)合使用，從而具有低成本、高通用性的優(yōu)點。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請旨在開發(fā)一種基于高效液相色譜(hplc)的快速高效檢測方法，基于hplc-pda對37種常見植物多酚進行分離與定量檢測，對方法的靈敏度、精密度和準確性進行評價，從而開發(fā)一種快速、低成本、準確且具有廣泛適應(yīng)性的植物多酚檢測方法。
2、一種基于hplc同時檢測中37種酚類物質(zhì)的方法，包括：
3、采用hplc-pda進行分離和檢測；其中，檢測條件為：
4、色譜柱為pfp色譜柱；檢測波長為280nm、330nm和360nm；流速為0.5～0.8ml/min；進樣量為8～12μl；柱溫為28～32℃；流動相a為含質(zhì)量百分數(shù)0.3％甲酸的水溶液，流動相b為甲醇；
5、洗脫梯度為：按體積百分比計，0-10min，95-90％流動相a和5-10％流動相b；10-16min，90-75％流動相a和10-25％流動相b；16-25min，75-60％流動相a和25-40％流動相b；25-50min，60-40％流動相a和40-60％流動相b；50-55min，40-33％流動相a和60-67％流動相b；
6、所述37種酚類物質(zhì)為：
7、楊梅素、香葉木素、木犀草素、金絲桃苷、異槲皮苷、對羥基苯甲酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、芥子酸、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素、兒茶素、表兒茶素、沒食子酸、阿魏酸、槲皮苷、槲皮素、異鼠李素、蘆丁、原兒茶酸、異鼠李素-3-o-新橙皮苷、水仙苷、對香豆酸、綠原酸、原花青素b1、木犀草苷、楊梅苷、圣草酚、花旗松素、漆黃素、染料木素、山奈酚、山奈酚-3-o-槐糖苷、山奈酚-3-o-蕓香糖苷。
8、可選的，所述流速為0.6ml/min；所述進樣量為10μl；所述柱溫為30℃。
9、可選的，所述色譜柱為hypersil?gold?pfp色譜柱；色譜柱的固定相為pfp(五氟苯基丙基)，直徑4.6mm，長度100mm，粒徑3μm。
10、最優(yōu)選的，所述檢測條件為：
11、色譜柱為hypersil?gold?pfp色譜柱；檢測波長為280nm、330nm和360nm；流速為0.6ml/min；進樣量為10μl；柱溫為30℃；流動相a為含質(zhì)量百分數(shù)0.3％甲酸的水溶液，流動相b為甲醇；
12、洗脫梯度為按體積百分比計，0-10min，95-90％流動相a和5-10％流動相b；10-16min，90-75％流動相a和10-25％流動相b；16-25min，75-60％流動相a和25-40％流動相b；25-50min，60-40％流動相a和40-60％流動相b；50-55min，40-33％流動相a和60-67％流動相b。
13、可選的，還包括：從待測植物中獲取植物提取物的過程。
14、可選的，所述獲取植物提取物的過程包括：
15、將各測試樣品粉碎后過60目篩網(wǎng)，取樣品粉末加入含80％甲醇的水溶液進行超聲輔助提取，該步驟中，樣品粉末與提取溶液的料液比為1：25，提取時間為30min；超聲提取后，5000rpm下離心10min后收集上清液，重復提取兩次，合并提取液，提取液經(jīng)0.22μm濾膜過濾后即得所述植物提取物，作為檢測樣品。
16、可選的，所述植物樣品來源于沙棘。例如，沙棘葉、沙棘果渣或沙棘果粉等。
17、本申請具有如下有益效果：
18、本申請的方法可用于同時對樣品中37種具代表性的酚類物質(zhì)進行準確定量。經(jīng)過方法學驗證，方法具有良好的線性、精密度與準確性，日內(nèi)與日間精密度均低于3％，加標回收率為96.88-103.75％。利用此方法對不同來源的沙棘樣品和其他植物樣品進行了檢測，證明了方法具有良好的普適性。該方法可用于食品分析、植物研究、成分開發(fā)等多個領(lǐng)域，具有廣泛的應(yīng)用價值。
1.一種基于hplc同時檢測植物中37種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流速為0.6ml/min；所述進樣量為10μl；所述柱溫為30℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱為hypersil?gold?pfp色譜柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，色譜柱的固定相為五氟苯基丙基pfp，直徑4.6mm，長度100mm，粒徑3μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：從待測植物中獲取植物提取物的過程。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述獲取植物提取物的過程包括：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物樣品來源于沙棘。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述植物樣品為沙棘葉、沙棘果渣或沙棘果粉。